Кросс селл: Что такое кросс-продажи | Unisender

Содержание

Cross-sell и Up-sell — в чём различие и как поднять сумму заказа

Есть два популярных подхода для повышения прибыли интернет-магазина: Cross-sell и Up-sell (перекрёстные продажи и поднятие суммы продажи). Зачастую в литературе оба подхода не переводятся или не объясняются достаточно подробно. Поэтому мы постараемся показать чем они отличаются и как их использовать: 

  • Upsell или поднятие суммы продажи – это мотивация покупателя потратить больше денег в вашем магазине, например, купить более дорогую модель того же продукта, добавить опции или услуги к приобретаемому продукту.
  • Crosssell или перекрёстные продажи – это также мотивация покупателя потратить больше денег, но уже через продажу товаров из других категорий, нежели изначально выбранная пользователем, т. е. в первую очередь продажа сопутствующих товаров

Оба термина часто используются взаимозаменяемо, потому что в обоих случаях решается одна задача – повышение прибыли с одного заказа. Тем не менее, понимание их различий позволяет лучше организовать оба способа и эффективней поднимать прибыль с заказа.

Рассмотрим пример:

Пускай покупатель просматривает страницу товара 4GB iPod Nano.

В боковой колонке выводятся:

  • 8 GB iPod Nano
  • 8 GB iPod Touch
  • 16 GP iPod Touch

Под кнопкой купить предложены аксессуары:

  • Наушники Apple In-Ear с микрофоном
  • Наушники Skull Candy
  • Карта iTunes
  • 8 GB Microsoft Zune

Ещё ниже выведена панель с популярными товарами:

  • MP3-плеер 4 GB Creative Zen
  • Портативный DVD-плеер
  • Griffin FM-передатчик для авто

В рассмотренном примере боковая колонка используется для поднятия суммы продажи (Upsell), так как в ней предложены более дорогие модели с большим объёмом памяти или более продвинутым экраном.

Покупатель может соблазниться на эти модели, решив что при чуть большей стоимости, преимущества того стоят.

Аксессуары под кнопкой купить в примере осуществляют как cross-sell, так и up-sell. Карта iTunes расширяет возможности продукта, а потому осуществляет up-sell, наушники являются дополняющим товаром и осуществляют cross-sell.

Панель с популярными продуктами можно назвать третьим способом мотивации покупателя увеличить сумму заказа. Увидев популярный переносной DVD-плеер, покупатель может добавить его в корзину, вспомнив, что давно уже хотел купить что-то подобное.

Вас также могут заинтересовать

Нет универсальных слов, под которыми надо показывать рекомендованные товары покупателю. Выбирайте подходящие к вашему ассортименту и следите за тем какие слова лучше работают. Вот несколько вариантов:

  • “Вам также могут понравиться:”
  • “С этим товаром часто покупают:”
  • “Те, кто смотрели этот товар, затем купили:”
  • “Часто покупают вместе:”
  • “Товар недели:”
  • “Другие товары марки Х:”
  • “Хорошо смотрится вместе с:”

Прямая рекомендация  “рекомендованные товары” работает хуже всего. Вам стоит подобрать такие слова, которые лучше всего будут рекомендовать продукты, объясняя, почему они рекомендуются.

Реализовать на платформе InSales рекомендации можно через сопутствующие товары (осуществляя cross-sell и up-sell), а также через создание дополнительных скрытых категорий, выводимых в боковой панели интернет-магазина (в ней можно разместить товар недели или спецпредложения).

Итого, мы разобрали, какие способы повышения суммы заказа существуют. В чём их отличие, какими словами их сопровождать и как заводить в бэкофисе магазина.

Пробуйте, экспериментируйте и смотрите, как это влияет на ваши продажи.

Читайте также:

Апсейл, кросс-сейл и даунсейл | medoed1.ru

Маркетинг

Для любого предпринимателя чуть ли не самым актуальным вопросом является увеличение продаж и возможность управления таким процессом. Для этого существуют специальные маркетинговые технологии и приемы. Чтобы быстро увеличить продажи на 20-30%, можно, во-первых, резко увеличить число покупателей.

Однако это не всегда возможно, поскольку привлечение новых клиентов связано со значительным ростом затрат, в том числе на рекламу. Второй способ – увеличить сумму «среднего чека». Проще говоря, создать такие условия, чтобы покупатель потратил больше денег в магазине. В этом случае расходы останутся на том же уровне, а вот доходы могут существенно вырасти. Кроме того, в данной ситуации есть еще один бесспорный плюс: чем больше человек тратит денег в определенном магазине, тем выше его лояльность. Иными словами, появляется желание прийти сюда за покупками еще и еще раз. Это достигается с помощью методов увеличения продаж up-sell и cross-sell, которые эффективно работают как в online так и offline-торговле.

Upsale

Up-sell– увеличение, буквально «поднятие», суммы продажи. Это маркетинговый ход, мотивирующий покупателя к увеличению суммы покупки. Представим, что человек хочет купить утюг. Выбрав модель, он обращается к продавцу, который предлагает покупателю стоящую рядом модель с расширенным набором функций.

Конечно, такой утюг немного дороже, но зато у него гораздо больше возможностей!

Подобным образом, хотя и с учетом специфики, можно строить работу online торговли. Например, посетитель интернет-магазина выбрал ноутбук с жестким диском 150 Gb. А на боковой панели сайта высвечивается такая же модель, но с хард-диском на 200 Gb. Причем разница в цене весьма несущественная. Покупатель в 90% случаев соблазнится более дорогим товаром, решив, что его преимущества того стоят!

Использование приема up-sell широко распространено и в сфере услуг. Вспомните знаменитые абонементы фитнес-клубов, программы обслуживания в автосервисах, да и отели, работающие по системе all inclusive! Увидев объявление с текстом: «Только сейчас стоимость годового обслуживания по цене 9 месяцев», покупатель сразу начинает считать и понимает, что это ему выгодно.

Cross-sale

Кросс-селл или перекрестные продажи. Это способ увеличения суммы среднего чека за счет дополнительных продаж сопутствующего товара.

Решая проблему клиента (здесь мы говорим об истинной и высокой цели продаж), мы предлагаем ему еще больше пользы от нового приобретения, тем самым реализуем кросс продажи.

Очень хорошо работает прием cross-sell и в интернет-магазинах, где нередко под описанием предлагаемого к продаже изделия добавляется фраза: «С этим товаром чаще всего покупают» и ниже выставляется целый список. И в большинстве случаев принцип cross-sell срабатывает!

Downsale

Это методика увеличения числа продаж, когда покупателю предлагается купить более дешевый товар или товар-заменитель, в том случае, если он просмотрел какие-то определенные позиции ассортимента, но ушел из вашего магазина без покупки. Вполне возможно, что завершить чекаут ему помешала именно высокая стоимость понравившегося товара. В этом случае даунсел может сыграть главную роль и в конечном итоге мотивировать сделать покупку.

Downsell часто применяется в почтовом маркетинге, когда потенциальным клиентам рассылаются персонализированные спец-предложения.

Другая разновидность даунселлинга – это продажи менее дорогого, но зато более маржинального товара. К вам в магазин пришел клиент за телефоном, но его смущает цена в 700 долларов? Предложите ему почти аналогичный вариант за 630, тем более ваша прибыль с него будет на 10 долларов выше. В этом случае также все в плюсе, а покупатель уйдет довольным еще и потому, что продавец не впаривал ему что подороже.

Вывод

Применение описанных техник подразумевает не просто предложение покупателю большего числа продуктов, а удовлетворения реальных потребностей покупателя. В любом случае если у вас получится применить данные техники к своему бизнесу, увеличение прибыли не заставит долго ждать.

Как увеличить средний чек с помощью cross-sell

На одной улице работают два ресторана. В одном из них к заказанному десерту официанты всегда предлагают новый кофейный напиток. В другом благодарят за заказ и уходят. Ежедневная выручка первого ресторана стабильно превышает оборот во втором заведении.

Так работают перекрестные продажи. В этой статье расскажем, как внедрить их в свой бизнес.

Суть cross-sell сводится к тому, чтобы предложить клиенту дополнительный товар, который может его заинтересовать. Например, он покупает телефон, а вы ему предлагаете чехол, защитную пленку на экран, услуги по установке программ на телефон, страховку от кражи телефона, портативную колонку, еще и кредит на этот же телефон. В отличие от up-sell вы не предлагаете более дорогой основной товар, вы продаете дополнительные продукты к тому, который выбрал покупатель. Но результат один – покупают больше.

Перекрестные продажи помогут:

Как реализовать стратегию cross-selling

Показывайте сопутствующие товары. Предлагайте покупателям товары, которые дополнят главную покупку. Это поможет привлечь внимание к другим продуктам и увеличить корзину. Чтобы понять, какие именно товары заинтересуют пользователя, обратитесь к поисковым запросам и статистике ваших же продаж. Например, вы продаете беспроводные колонки.

Вбивайте в поисковую строку «портативные колонки» и смотрите на подсказки. Еще один способ понять интересы пользователя вокруг товара – изучить фразы-ассоциации. Они находятся под результатами поиска в Google и «Яндексе». Или же поднимайте статистику продаж: скажем, вы заметили, что с услугой вечернего макияжа многие клиенты заказывают коррекцию бровей. Вот и продукт, который может стать легкой продажей через cross-sell.

Применяйте дополнительные крючки для реализации стратегии. Используйте разные стимулы: скидки, специальные предложения, бесплатную доставку на второй товар, накопительные бонусы и пр.

Пакетируйте. Предложите пользователю набор товаров со скидкой на комплект. В комплект должны входить товары, которые хорошо сочетаются между собой – взаимодополняющие позиции. Например, к ноутбуку предложите купить сумку + средство для чистки экрана + салфетки. Все эти товары обычно используют владельцы ноутбуков, но у многих людей нет стимула приобрести все вместе. Предложив скидку на комплект, вы мотивируете клиента купить сейчас и именно у вас.

Предлагайте действительно нужный cross-sell товар. На любом этапе покупки вы должны быть уверены, что рекомендуемый товар, на самом деле, может быть полезен потенциальному покупателю. Для интернет-магазинов существуют программы, позволяющие анализировать предпочтения пользователей с помощью систем аналитики. Изучите данные о просмотренных товарах и сделанных покупках (брендах, ценах и потребительских свойствах). Если пользователь чаще всего просматривает наушники Samsung, предложите ему варианты именно этого бренда. Выбирайте товары схожей ценовой категории. Посмотрите в аналитике, что чаще всего покупают люди с этим товаром.

Не предлагайте слишком много товаров. Покупатель может запутаться. Если хотите предложить много вариантов на сайте, используйте блоки типа «карусель», показывающие сначала самые подходящие. Если в офлайн-продажах предложить покупателю слишком много вариантов дополнительных товаров, мы рискуем «перегрузить» его внимание. Предлагайте один-два варианта. Cross-sell и продажа сопутствующих товаров

1. В карточке товара

Во многих интернет-магазинах перекрестные продажи реализуют в карточке товара. Блок «Вам могут понравиться» показывает товары схожей ценовой категории и аналогичного бренда. Владельцы магазина понимают, что посетителю страницы могут не подойти характеристики модели, и пытаются заинтересовать его похожими вариантами. Товары выбираются исходя из характеристик модели. В предложенном примере (интернет-магазин Lamoda) – это повседневная обувь на платформе.

2. На странице оформления заказа (в корзине)

Когда клиент добавил товар в корзину и оформляет заказ, Lamoda снова показывает ему потенциально интересные товары. Может быть, покупатель вспомнит, что ему нужна еще одна пара туфель и увеличит заказ.

3. Всплывающие окна

Например, в магазине Speedo после добавления товара в корзину появляется всплывающее окно с лучшим предложением дня. Таким образом, они побуждают покупателей приобрести популярную модель по доступной цене.

Лайфхак: персонализируйте обращение к клиенту. Замените заголовок «Рекомендованные товары» на более оригинальный. Например:

  • Товары для людей со схожими целями.
  • Вчера покупали.
  • Будет полезно вместе с вашим товаром.
  • Вам могут понравиться эти товары.
  • Товары в дополнение со скидкой.

Тестируйте разные названия. Смотрите на конверсию и отслеживайте – увеличивает ли это продажи.

4. Продажа сопутствующих товаров партнеров

Клиента можно заинтересовать не только своими сервисами, но и партнерскими. Такое сотрудничество выгодно обеим сторонам. К партнеру приходят новые клиенты, а вам за это выплачивается партнерское вознаграждение. Пример такого сотрудничества – сервис автоматизированной таргетированной рекламы Segmento Target и EnvyCRM. Подписчики сервиса Segmento Target получают в рассылке предложение установить CRM по специальному промокоду со скидкой.

5. Бесплатный тестовый период на услугу/пробный товар

Дополнительные услуги на сайте авиакомпании Wizz Air, которые могут заинтересовать туристов:

6. По телефону во время заказа

По телефону обязательно уточните все детали заказа. Предложите купить дополнительный товар. То же самое при записи (в стоматологию, салон красоты) – сразу старайтесь делать перекрестную продажу.

7. Письмо / мессенджер / SMS

Для продажи дополнительных услуг и услуг партнеров можно использовать любой способ связи.

8. Ретаргетинг

После посещения сайта Wizz Air на других сайтах можно увидеть их специальные предложения:

9. Продажа дополнительных продуктов

Перекрестные продажи эффективнее, если объединять дополнительные продукты в специальное предложение. Стоимость такого набора может быть выше в два раза. Больше поднимать цену нет смысла, чтобы не «спугнуть» покупателя. Подбирать товары для бандлов можно исходя из статистики. Для этого нужно изучить, что покупатели чаще всего покупают совместно с этим продуктом. Товары должны дополнять друг друга по функционалу и вместе стоить дешевле. Пример от магазина Rozetka:

На сайте Best Buy предлагают сопутствующие товары, когда клиент добавляет товар в корзину. Эти товары всегда дополняют сделанный выбор. Например, посетитель покупает офисную программу для работы с текстами, а ему предлагают программы по работе с таблицами и обработке видео. Так вы покажете клиенту тот ассортимент, который он не увидел, и подтолкнете к дополнительной покупке.

На сайте Microsoft рекомендуют дополнительные продукты и услуги на специальной странице, которая открывается после добавления товара в корзину. К интеллектуальным продуктам предлагают антивирусную программу.

10. Продажа похожих товаров

The Camera Store выводит похожие продукты в боковую правую панель в карточке товара. Эти продукты совпадают по функционалу и решают аналогичные проблемы клиентов. Очень удобно, ведь пользователю может не понравиться просматриваемый товар и он зайдет в карточку любого другого. Он увидит: «Здесь классный ассортимент. Я точно смогу что-то купить».

11. Часто покупают вместе

В магазине Wayfair призыв к перекрестным продажам сделали в виде кнопки «Часто покупают вместе». Нажав на кнопку, вы увидите товары этой же ценовой категории. Чаще всего это продукция из схожих разделов. Чтобы создать этот раздел, сотрудники магазина изучают аналитику по покупаемым товарам.

В магазине Pottery Barn также в корзине пользователя призывают к покупке надписью «Пользователи, сделавшие аналогичный заказ, также купили». Этот блок формируется после анализа статистики. Собирается информация по заказам, в которые входила покупка. В блоке рекомендаций отображаются соответствующие товары.

12. Перекрестная продажа товаров офлайн

В сети ресторанов McDonald’s регулярно используют перекрестные продажи. Покупателям на кассе предлагают купить картошку к гамбургеру, заказать увеличенный размер порции, а также другие товары, которые могут заинтересовать посетителя.

Распространенная практика – продажа дополнительных услуг в гостиницах. В отелях продают много дополнительных услуг (от аренды велосипедов до билетов в театры), размещая эту информацию на мониторах, в лифтах, буклетах.

Как подбирать товары под cross-sell

  • Используйте информацию о посетителях (их покупках и посещениях), чтобы создать блок «Вам могут понравиться».
  • Изучайте информацию о покупаемых товарах, чтобы создать блок «Часто покупают вместе».
  • Используйте подсказки в поисковой выдаче, чтобы создать блок дополняющих товаров и продуктовые наборы.
  • Продумывайте за клиента, какие дополнительные продукты (товары или услуги) могут понадобиться в будущем при использовании вашего основного продукта.
  • Изобретайте новые дополнительные услуги, которые могут быть полезны при покупке (сборка, обучение, как использовать продукт, расширенная гарантия, членство в клубах владельцев продукта, годовые абонементы, гарантированный обратный выкуп продукта).

Выводы

Персонализируйте обращение к клиенту. Сделайте так, чтобы он почувствовал, что вы подобрали лучшие предложения именно для него.

Используйте разные варианты перекрестных продаж в зависимости от текущих целей.

Анализируйте принятую стратегию и избавляйтесь от неэффективных методов.

Фото: instagram.com

UPMarketing — АПСЕЙЛ, КРОСС-СЕЙЛ, ДАУНСЕЙЛ 💱 ⠀ Есть… | Facebook

АПСЕЙЛ, КРОСС-СЕЙЛ, ДАУНСЕЙЛ 💱

Есть маркетинговые приемы, которые позволяют увеличить продажи без дополнительных вливаний бюджета:

🔷Апсейл / апселл (upsell)

Увеличение суммы покупки, предложение купить более дорогой продукт.

Примеры:
◼️Клиент собирается купить у вас основной курс, а вы предлагаете ему VIP вариант — с вашей личной поддержкой и дополнительными материалами.
◼️Клиент хочет купить телефон, а ему предлагают почти такой же, но чуть дороже и с расширенным набором функций.
◼️Вместо разового посещения фитнес-центра предлагается абонемент.

Главное здесь — обосновать ценность более дорогого продукта и показать выгоды покупки для клиента.

🔷Кросс-сейл / кросс-селл (cross-sell)

Перекрестные продажи, предложение купить что-нибудь в довесок к основному продукту.

Примеры:
◼️чехол, защитное стекло или расширенная гарантия к телефону
◼️булочка к кофе
◼️консультация диетолога к абонементу в фитнес-центре

Получается, помимо выгоды от основной покупки, вы предлагаете клиенту получить дополнительную пользу.

🔷Даунсейл / даунселл (downsell)

Предложение более дешевого продукта.
Если клиент хотел бы купить ваш продукт, но не располагает нужной суммой, можно предложить ему более бюджетный вариант.

Пример:
◼️телефон другой марки или с чуть меньшим набором функций
◼️более короткий курс, в котором, тем не менее, есть все необходимые основы

Задача — помочь клиенту решить проблему в рамках его бюджета. Вы в любом случае остаетесь в плюсе, так как совершаете продажу. А также приобретаете лояльного клиента, который рад, что вы вошли в его положение.

🔻Хотите, подскажу, какие допродажи можно реализовать в вашем бизнесе?

Напишите в комментариях вашу сферу, а я подкину идей, что в вашем случае может быть апсейлом, кросс-сейлом или даунсейлом.⏬⏬⏬

как увеличить количество товаров в корзине ᐉ WEBMAESTRO

Мы уже писали о том, какими характеристиками должен обладать прибыльный интернет-магазин в статье «10,5 секретов прибыльного интернет-магазина». Теперь хотим рассказать об увеличении количества товаров в корзине.
Cross-sell (кросс-селл или перекрестные продажи) — это побуждение покупателя приобрести товары из других категорий (сопутствующие товары).

В маркетинге еще существует такое понятие, как Up-sell (ап-селл или поднятие суммы продажи) — это побуждение покупателя приобрести более дорогую модель выбранного товара (с дополнительными опциями или услугами).

 

Суть кросс-селлинга заключается в том, чтобы предложить покупателю дополнительные товары, которые могли бы его заинтересовать.

Как правильно использовать кросс-селлинг?

Чтобы понять, как правильно использовать данный метод, нужно разобраться что продавать, кому и как. Также нужно ориентироваться в механизмах перекрестных продаж.
Главным фактором эффективности кросс-продаж является актуальность предложения:

Предложить определенному пользователю ➟ определенный товар ➟ в определенное время ➟ в определенном месте

В статье «5 стадий принятия решения о покупке на сайте» мы уже рассказывали какие этапы проходит пользователь прежде, чем совершить покупку:

  1. Осведомленность (завлечь как можно больше потенциальных покупателей).
  2. Ознакомление (вызвать желание купить именно у Вас).
  3. Рассмотрение (побудить совершить покупку).
  4. Покупка (совершение покупки).
  5. Лояльность (если покупатель остался удовлетворенной приобретенным товаром, он станет постоянным клиентом).

Для перекрестных продаж больше подходят потребители на 4 этапе, которые уже определились с выбором и готовы совершить покупку. Товар, который они выбрали характеризует их проблему и потребности. Если Вы будете знать потребности, то сможете подобрать актуальные товары для дополнительных cross-sell продаж.

Дополнительные cross-sell товары

Такие товары служат дополнительной комплектацией для полного решения нужд пользователей. 
Например, Вы покупаете душевую кабину. В список рекомендаций к ней войдет душевой гарнитур (ручка лейка, держатель для душа, душевая штанга, шланг для душа).

Спонтанные cross-sell товары

Спонтанными товарами являются товары, которые покупают под влиянием эмоций. Они напрямую не дополняют товар, но имеют непосредственное отношение к нему.
Например, Вы покупаете ту же душевую кабину и Вам предлагают средство для мытья сантехники по скидке 10%. Если основной товар не имеет дополнений, то можно использовать спонтанные товары.

Варианты реализации cross-sell продаж

Модули кросс-селлинга обычно располагают в карточке товара, в корзине, на странице подтверждения покупки и в e-mail письмах.

Cross-sell в карточке товара

Этот интернет-магазин предлагает дополнительные аксессуары в карточке товара:

 

Cross-sell в корзине

Некоторые популярные интернет-магазины используют сразу 3 модуля Cross-sell продаж, например «Покупатели, которые просматривали этот товар, также интересуются», «Популярные аксессуары», «С этим товаром покупают»:

Cross-sell на странице подтверждения покупки

Cross-sell в e-mail-рассылке

Перекрестные продажи можно выносить и за рамки интернет-магазина. Например, в e-mail-письмах подтверждения заказа или брошенной корзины.

 

Рекомендации по организации перекрестных продаж

  1. Отслеживайте информацию о предпочтениях пользователей (просмотренные страницы, списки желаний, сравнения и т. д.).
  2. Действуйте оперативно, пока потребитель не купил товар в ваших конкурентов.
  3. Мотивируйте потребителей (акции, бесплатная доставка, бонусы и т.д.).
  4. Проверяйте и анализируйте любые изменения в системах аналитики.
  5. Модуль кросс-селлинга нужно выделить, но так, чтобы он не отвлекал от основного товара.
  6. Модуль должен быть лаконичным, не перегружен лишними фишками.
  7. Рекомендованные товары должны быть релевантными.
  8. Если перекрестных товаров слишком много — используйте маркировку.
  9. Используйте e-mail-рассылку с товарами оставленными в корзине.
  10. Для кросс-селлинга лучше использовать высокомаржинальные товары.
  11. Чередуйте перекрестные товары.
  12. Помните ― для каждого интернет-магазина нужно разрабатывать индивидуальную стратегия перекрестных продаж.

Убыточный кросс-селл и 4 типа невыгодных клиентов.

Обзор статьи из Harvard Business Review

В среднем для компаний убыточными являются примерно 50% клиентов. 

Кьелл Нордстрем и Йонас Риддерстрале

«Бизнес в стиле фанк»




Не все клиенты одинаково выгодны для компании — об этом известно давно. Есть множество вариантов поиска наиболее ценных клиентов и, наоборот, — убыточных для бизнеса.  Традиционно с поиском наиболее или наименее ценных клиентов может справиться сегментация. АВС модель, например, сегментирует клиентов на группы А, В и С в зависимости от их ценности для бизнеса. Подход этот простой и всем понятный, однако не лишен недостатков. Давайте посмотрим на клиентов не только с точки зрения доли их выручки в общей выручке компании, а еще и с точки зрения затрат — временных или денежных.  Практически в любом бизнесе существует группа клиентов, затраты на которых превышают прибыль, которую они приносят. Такая ситуация одинаково типична как для В2В, так и для В2С, и ее можно назвать еще одним вариантом «дырявого ведра» — компания имеет утечку прибыли и важно знать о ней.   Наиболее известный «типаж» убыточных клиентов, которых мы периодически находим в клиентских базах данных — это «охотники за скидками«. Вычисляем мы таких покупателей при помощи поведенческой аналитики по покупкам, которые совершены либо в периоды акций, либо строго на акционный товар. Если клиент покупает всегда только товар со скидкой, его прибыльность и тем более лояльность к компании конечно же вызывает сомнения.

Таких покупателей компания должна «знать в лицо» (знать ФИО, ID клиента или номер карты), чтобы не вкладывать в их развитие, не предлагать дополнительные товары (кросс-селл кампании) и не тратиться на коммуникацию.

Сегодня хочу поделиться обзором статьи  «Изнанка перекрестных продаж» из известного журнала Harvard Business Review.  Статья замечательно иллюстрирует 4 типа покупателей, которых нужно «уметь узнавать» для уменьшения потерь бизнеса, а значит — для повышения прибыли.




Итак, 4 типа клиентов, кросс-селлинг для которых вредит вашему бизнесу:
1) претендуют на особое обслуживание
2) снижают доходность

3) выжимают максимум из промоакций
4) экономят, строго следя за тратами

Можно и нужно понимать пропорции этих сегментов, типичные для вашей сферы, и желательно — для своей компании.



Что делать?
1. Распознать убыточных клиентов (всего может быть 4 типа)
2. Перейти от простых «кросс-предложений» к умным продажам, не забывать про инструменты математического моделирования, как помощники экспертному мнению (кластеризация и скоринговые модели)

3. При формировании маркетинговых кампаний исключать потенциально убыточных покупателей

Краткое резюме и главная идея: прежде чем начать новую кампанию по кросс-селлингу, задумайтесь на минуту, а действительно ли вам нужны эти клиенты?


Картинка целиком:




Если вы хотите получать свежие новости из мира клиентской аналитики, не забудьте подписаться на рассылку


Узнать детали на персональной консультации по сегментации — по ссылке

Что такое кросс-сейл (cross-sell) и апсейл (up-sale)

Приветствую вас на страницах блога inetsovety.ru. Каждый предприниматель, занимающийся торговлей, хочет продавать больший объем продукции при минимальных финансовых затратах. Однако нередко усилия не увенчиваются успехом или, более того, приводят к снижению дохода. От таких издержек торгового бизнеса не застрахован никто, однако есть одно «но».

Существуют определенные инструменты, при помощи которых можно увеличить показатель продаж, но не понести существенных финансовых потерь. Это Up sell и cross sale.

Что это такое, и как работает каждая из этих схем? Мы рассмотрим основные разновидности данных инструментов, их особенности и положительные стороны. Это будет важно и полезно знать, если вы решили всерьез заняться торговым бизнесом.

Понятие, виды и особенности кросс продаж

Кросс продажи – что это такое? Это довольно интересный и популярный инструмент, которым пользуются многие бизнесмены, работающие в сфере торговли. Они направлены на приумножение капитала фирмой, занимающейся сбытом товаров.

Если говорить простыми словами, то кросс продажи – это одновременная реализация разных видов одного и того товара конкретному покупателю. Но, скажем еще проще: это дополнительная продажа продукции после реализации основного предмета торговли, в котором заинтересован покупатель.

Кросс продажа имеет одну важную цель, которая заключается в повышении прибыли предприятия. Обычно в этом случае используется инструмент продажи других, дополнительных, услуг или товаров. При этом они не пользуются большим спросом у покупателей, но для фирмы-продавца их реализация является дополнительным источником получения прибыли.

Так, мы разобрались в том, что такое кросс продажи. Теперь давайте рассмотрим их разновидности, каждая из которых имеет свои особенности.

к оглавлению ↑

Разновидности кросс продаж

Выделяют 3 вида кросс продаж:

Реализация дополнительной продукции. Это то, о чем мы уже вскользь упоминали ранее. При этом клиенту продается продукт, который никак не связан с основным товаром. То есть, он является отдельным, полноценным продуктом реализации. Такая разновидность перекрестных продаж часто применяется в корпоративном секторе торгового бизнеса.

Рассмотрим небольшой пример. Предположим, у вас есть свой магазин, в котором вы продаете молочную продукцию. Однако вы решили параллельно с этим заняться выращиванием овощей, которые тоже будут предназначены для продажи. Во время обслуживания очередного клиента вы, кроме молока, можете предложить ему приобретение свежих овощей. Скорее всего, он согласится на ваше предложение.

Пакетный кросс селлинг. В этом случае вы к основному продукту прилагаете сопутствующий товар. Отличным тому примером служит покупка мобильного телефона. Так, при продаже смартфона вы можете предложить покупателю приобрести еще и чехол или гарнитуру к нему. Многие клиенты с удовольствием соглашаются на такую сделку. Часто в пакетных кросс продажах используется понятие скрипта продаж.

Скрипт в перекрестных продажах – это модель разговора продавца и покупателя. Этот термин имеет английское происхождение. Script переводится как «сценарий». В сфере торговли модель общения обслуживающего персонала с клиентами должна обязательно содержать призыв к действию: «купите», «посмотрите» и т. д. Колл ту экшн (призыв к действию) должен быть органично включен в разговор. Нельзя навязываться клиенту, либо, что еще хуже, принудительно подталкивать его к покупке дополнительного товара.

Продажа товаров одной категории тому же покупателю. В данном случае кросс продажи – это понятие довольно широкое. Ярким тому примером является репетиторство. Предположим, родители водят к вам ребенка, чтобы вы подтянули его по русскому языку. Но за дополнительную плату вы можете предложить им подготовить ученика к экзамену по литературе.

На заметку. Кросс селл нередко создает проблемы опытным маркетологам. Прежде всего, это связано с тем, что каждый из продавцов своего отдела отлично знает особенности реализуемого им товара. При переводе его в другой торговый отдел появляются сложности. Например, продавцу цветов будет крайне сложно работать в отделе продаж стиральных машин.

Так, мы рассмотрели главные особенности кросс продаж в магазинах разной направленности. Но данный инструмент используется и в других сферах деятельности. Например, в банковской отрасли.

Кросс продажи в банке – это предложение будущему или текущему клиенту услуги в дополнение к той, которую он уже получает в финансовом учреждении. Например, при оформлении зарплатной карты консультанты практически всегда рекомендуют своим клиентам оформить также и кредитный счет.

Кросс продажи в страховании – это предложение оформления дополнительного типа страхования параллельно с уже существующим. Ярким примером является создание страхового полиса ОСАГО. Во время составления и подписания договора страховой агент может предложить вам дополнительно оформить договор добровольного страхования гражданской ответственности.

Это то, что необходимо знать о кросс продажах. Но существует еще один инструмент, о котором нужно знать. Это – апсейл, или upsell.

к оглавлению ↑

Понятие апселлинга, его главные особенности

Up sale – что это такое? Это еще один инструмент продаж, который заключается в побуждении клиента к приобретению обновленной, усовершенствованной версии того или иного товара. Нередко данный тип торговли путают с кросс-селлингом, хотя в действительности это несколько разные вещи.

Так, апселлинг – это понятие, которое можно тесно связать с апдейтом или апгрейдингом. Оба термина подразумевают выполнение каких-то обновлений, изменений в том или ином продукте. Так вот, главной задачей продавца, работающего по схеме апселлинга, является умение вызвать у клиента интерес к обновленному варианту покупаемого им товара. И не только заинтересовать, но и побудить к совершению покупки.

На заметку. Апсейл и кросс сейл имеют одно довольно значимое отличие. Кросс продажа направлена на сбыт дополнительного товара, который может не иметь никакой взаимосвязи с основным предметом торговли. А вот апселл – это сбыт новой версии конкретного продукта, которая стоит на порядок дороже своего «предшественника».

Как понять, что компания работает по данной модели продажи товаров или услуг? Очень просто: разобраться в том, как функционирует апселл, нам помогут следующие примеры:

  1. Сотрудники авиакомпании могут предложить вам приобретение билета не на эконом, а на бизнес-класс. Такой перелет будет более комфортным, но при этом и обойдется вам дороже. Это техника апсейл, применяющаяся во всем мире.
  2. Действует данная модель продаж и в ресторанном бизнесе. Например, обыкновенный салат вы можете заказать по относительно низкой цене. Но официант может предложить вам добавление креветок или куриного филе в блюдо. И если вы согласитесь, то кулинарное изделие сразу прибавит в цене. Если официанту удалось уговорить вас на это, то можно сказать, что он хорошо разбирается в работе по модели
  3. Не обошла стороной эта технология и современные возможности интернет сферы. Так, при скачивании учебника или любой электронной книги бесплатно с того или иного сайта, вы можете увидеть предложение от разработчиков о приобретении аудио- или бумажной версии этой же книги. Это тоже одна из разновидностей работы по модели up sell продаж.

И таких примеров может быть очень много. Эта техника ведения торговли окружает нас повсюду, о чем далеко не каждый из нас догадывается. Но чтобы она успешно работала, необходимо помнить о том, что:

  • не стоит вынуждать клиента приобретать товар или услугу по цене, которая значительно превосходит стоимость изначально выбранной продукции;
  • нельзя навязываться или принудительно подталкивать покупателя к приобретению товара или заказу услуги;
  • необходимо фокусироваться на потребностях клиента, выбирая аргументы в пользу того, чем предложенный вами вариант лучше того, который выбрал покупатель;
  • прибегайте к использованию наглядных примеров и сравнений двух видов товара;
  • побуждайте клиента к покупке более дорогого продукта, аргументируя это наличием на него скидки, которая имеет минимальный срок действия.

Это основные техники апсейлинга. Теперь вы знаете, что это за модель продаж upsell, и какими являются ее главные особенности. Техника довольно простая, но при этом эффективная. И нередко именно благодаря ей реализаторы товаров или услуг выходят на высокий уровень дохода.

Есть еще один вопрос, который напоследок следует вкратце рассмотреть: что это такое downsell. В отличие от апсейла и кросс продаж, даунселл не является отдельной моделью реализации товаров. Это техника создания торгового предложения в том случае, когда клиент говорит «нет» в ответ на предложение продавца о приобретении более дорогого товара. То есть, когда покупатель не может решиться на этот шаг, продавец должен создать для него такие условия, которые помогут ему, в конце концов, пойти на сделку.

Даунселл – это еще один «максимизатор» прибыли, который успешно и эффективно функционирует в сфере современного бизнеса.

С уважением, Виктория – блог inetsovety.ru

Ламинин и Крест | Ответы в Бытие

Многое было сделано из ламинина, имеющего крестообразную форму. Но должны ли мы искать такие «знамения», чтобы доказать точность Слова Божьего?

Ключевые слова : ламинин, крест, христианство, икона, молекулы, биология, внеклеточный матрикс, внеклеточный матрикс, клетки, правда, Иисус Христос, знаки, Слово Божье

За последние несколько месяцев мы получили множество вопросов, касающихся популярной христианской иконы — протеина ламинина. Интересно, что Ламинин имеет форму креста (см. Здесь).Фактически, быстрый поиск в Интернете обнаруживает несколько веб-сайтов, на которых продаются футболки, коврики для мыши, наклейки, кофейные кружки и множество других товаров с изображением белка ламинина. Эти элементы обычно включают такие крылатые фразы, как «Великие дизайнеры всегда оставляют свой след» или «Отпечаток Создателя». Как молекулярный биолог, я, конечно, могу оценить волнение по поводу белка (который действительно показывает, какой я ботаник!), Но белок как символ христианства?

Что такое ламин?

Ламинин — это белок, входящий в состав внеклеточного матрикса человека и животных. Внеклеточный матрикс (ЕСМ) находится вне клеток и обеспечивает поддержку и прикрепление клеток внутри органов (наряду со многими другими функциями). У ламинина есть «руки», которые связываются с другими молекулами ламинина, образуя слои и связываясь с клетками. Ламинин и другие белки ЕСМ по существу «склеивают» клетки (например, выстилающие желудок и кишечник) с основанием соединительной ткани. Это удерживает клетки на месте и позволяет им нормально функционировать. Структура ламинина очень важна для его функции (как и для всех белков).Один из типов врожденной мышечной дистрофии возникает из-за дефектов ламинина.

Как Ламинин стал иконой христианства?

Аргумент, который стал довольно распространенным в современном христианстве, хорошо иллюстрируется отношением структуры и функции ламинина к библейским истинам. Этот маленький, неизвестный белок стал популярным после того, как его использовали в проповеди. Тема ламинина быстро появилась во многих электронных письмах и блогах, и в конечном итоге ее форма нашла свое отражение в мерчендайзинге (например,г. , футболки и кофейные кружки).

В проповеди Луи Джильо спрашивает, как мы можем узнать, что Бог будет держать нас вместе (что он выводит из 99019 Псалма 33 ). Он заявляет: «Это действительно то, что мы хотим узнать сегодня, и я расскажу вам, как вы можете узнать сегодня, что Бог всегда будет держать вас вместе, несмотря ни на что». Затем г-н Джильо обсуждает функцию ламинина (как клея) и его структуру (крест) в организме. Он связывает это с Колоссянам 1:17, , в котором говорится: «Он [Христос] прежде всего, и в Нем все держится.Его аргумент в основном состоит в том, что Бог создал ламинин в форме креста и дал ему особую функцию «склеивания» в теле, чтобы мы могли познать (по его словам) истину о том, что Христос держит все воедино.

В чем проблема такого типа аргумента?

Хотя я ценю страсть г-на Джильо к Слову, я бы предположил, что такой аргумент не годится. (См. Аналогичный пример в Божьей аптеке .) Основная проблема с аргументами этого типа состоит в том, что кажется, что что-то за пределами Священного Писания (в данном случае ламинин) жизненно важно для познания истинности библейской истины. Ламинин используется для доказательства библейской истины. Однако мы никогда не должны использовать наше ошибочное, ограниченное понимание мира, чтобы судить безошибочное Слово Божье. То, что мы наблюдаем в мире, безусловно, может быть использовано для подтверждения Слова Божьего (и это так), но наши ограниченные наблюдения не в состоянии оценить бесконечные вещи Бога. Только если мы начнем с Библии как с нашего окончательного стандарта, мы сможем иметь рациональное мировоззрение, которое будет иметь смысл в доказательствах (см. «Атеизм: иррациональное мировоззрение» и «Эволюция: антинаука»).

Структура ламинина не пользовалась популярностью до 2008 года, но я не сомневаюсь, что многие христиане до этого времени доверяли истине, изложенной в Колоссянам 1:17, , потому что это Слово Бога. Было бы Колоссянам 1:17 менее верным, если бы ламинин не имел форму креста? Нет. Если через пять лет мы обнаружим, что белок ламинин на самом деле имеет другую форму (на самом деле, некоторые электронные микрофотографии белка вообще не напоминают крест, см. Здесь, стр. 149), изменит ли это обнаруженную истину. в Колоссянам 1:17? Нет, потому что наша вера в истинность того, что Христос объединяет все, должна начинаться и заканчиваться только Словом Божьим!

В поисках знаков

К сожалению, этот тип аргумента, который эффективно рассматривает наше ошибочное, ограниченное знание доказательств как превосходящее Слово Божье, очень популярен в современном обществе, особенно среди молодежи.Как бывший профессор христианского колледжа, я имею большой опыт общения со студентами. Я потерял счет, сколько раз студенты приходили ко мне в офис и говорили, что собираются сменить специальность, встречаться с кем-то или решить что-то сделать, потому что Бог дал им «знамение». Я всегда задавал им серию вопросов, услышав об их «знамении»: молились ли они и просили ли Бога руководства? Они изучали Библию? Разговаривали ли они с духовно зрелыми наставниками? Обычно это встречалось нерешительным «да», а затем возвращалось к рассказу об удивительном «знаке».

Конечно, Бог может использовать знамения, чтобы открывать вещи, и это очевидно из Писания. В Луки 2:12 ангел говорит пастухам: «Это будет вам знамением: вы найдете младенца, завернутого в одежду и лежащего в яслях». Однако Иисус также предостерегает тех, кто неправильно ищет знамений ( Матфея 16: 4 ). В сегодняшнем обществе «быстрого питания» многие люди предпочитают «проезд на автомобиле», когда дело доходит до познания Божьих истин. Знак намного быстрее, чем изучение и рассуждение на основании Священного Писания, уделение времени молитве и обсуждение Слова Божьего с другими верующими.

Молодые христиане начали сомневаться в Слове Бога (особенно в книге Бытия), потому что это то, что вбивается им из светского мира через большую часть средств массовой информации и большинство государственных школ. Многие отчаянно хотят принять утверждения Писания, но их неправильно учили думать, что ум без посторонней помощи является высшим стандартом для получения знаний. Вот почему аргумент, используемый в отношении белка ламинина, вероятно, находит отклик у них, а также у многих других христиан.Как сказал один блоггер: «Я верю, что Бог посылает нам сообщение, в котором говорится, что я [sic] здесь и я [sic] держу вас вместе». И все же Притчи 1: 7a говорят нам: « страх Господень — начало познания» (см. Также Колоссянам 2: 3 ).

Подумайте, что происходит, когда люди пытаются доказать воскресение Христа (библейскую истину), не опираясь на аргументы. Наука ясно одно: мертвые люди не возвращаются к жизни. Итак, доказывает ли это, что Иисус не воскрес? Конечно, нет! Наука и человеческое мышление — не предел возможного; Бог — предел.Священное Писание должно быть нашим высшим стандартом для понимания этого чудесного события.

Если начать с рассуждений без посторонней помощи и прочитать наши собственные идеи в Библии, это может привести нас к всевозможным абсурдным выводам. Например, вирус Эбола, вызывающий ужасную форму геморрагической лихорадки, которая обычно приводит к смерти, имеет структуру того, что обычно называют пастушьим посохом. Библия говорит нам, что Иисус — Добрый Пастырь ( Иоанна 10:14, ). Итак, если форма ламинина подтверждает библейскую истину о том, что Христос объединяет все воедино, то какой мы можем сделать вывод о Добром пастыре по форме вируса Эбола? И если ламинин может представлять крест, то почему не меч ( Ефесянам 6:17; Евреям 4:12 )? Как христиане, мы не можем позволить нашим ошибочным, ограниченным толкованиям вытеснить Слово Божье ( 2 Петра 1:20 ).

Заключение

Римлянам 1:20 ясно дает понять, что мы можем познать Бога через то, что Он создал. Бог, безусловно, создал белок ламинин и дал ему структуру, которая позволяет ему выполнять функцию, которую Он назначил для него. Фактически, в одной из ранних статей о структуре и функции ламинина говорилось следующее: «Шаровидные и стержневидные домены расположены в протяженной четырехлепестковой крестообразной форме , которая хорошо подходит для посредничества между удаленными участками на клетках и другими компонентами внеклеточный матрикс »(выделено мной). 1

Верховенство Христа, о котором говорится в Колоссянам 1: 15–20 , вероятно, один из моих любимых отрывков во всем Писании. Павел начинает говорить о Христе как Творце и переходит к Христу как Искупителю. Это истины не потому, что они апеллируют к нашему беспомощному рассуждению, а потому, что они открыты в Слове Божьем.

Как ионы проходят через липидный бислой клеточной мембраны? | Образование

Эрик Бэнк, MBA, MS Finance

Клеточная мембрана в первую очередь отвечает за поддержание благоприятной среды внутри клетки.Он делает это, контролируя прохождение молекул и ионов в клетку или из нее. Ионы — это заряженные атомы, в которых количество протонов отличается от количества электронов. Клеточная мембрана использует белки, чтобы помочь ионам пересекать клеточную мембрану.

Клеточная мембрана

Клеточная мембрана состоит из двойного слоя фосфолипидов. Каждая молекула фосфолипида содержит фосфатную головку и два липидных или жирных хвоста. Фосфаты образуют внутренние и внешние границы мембраны, а липидные хвосты занимают пространство между ними.Липиды гидрофобны, то есть они отталкивают воду и вещества, растворенные в воде, такие как ионы натрия, калия и кальция. Трансмембранные белки пронизывают клеточную мембрану, создавая поры, которые могут помочь ионам и другим молекулам избежать липидного барьера.

Ионные каналы

Ионные каналы — это класс трансмембранных белков, которые обеспечивают высокую скорость ионного потока, питаемого электрохимическим градиентом через клеточную мембрану. Различия в концентрации ионов по обе стороны от мембраны создают градиент, при котором ионы перемещаются из областей с более высокой концентрацией в области с более низкой концентрацией.Различные каналы специфичны для разных ионов, хотя некоторые каналы могут обрабатывать более одного типа ионов. Ионные каналы устроены как крошечные ворота, которые открываются или закрываются, чтобы пропустить ион. Каналы пассивны и не используют энергию клетки для работы.

Первичный активный транспорт

Ионные насосы — это белки, которые расходуют энергию, позволяя ионам обходить липидный бислой с помощью градиента концентрации или без него. Первичный активный транспорт использует насосы, созданные из ферментов, известных как АТФазы, которые высвобождают энергию из молекулы первичной энергии клетки, аденозинтрифосфата или АТФ.Белок использует высвободившуюся энергию для изменения своей формы, перемещая ион с одной стороны на другую. Первичный активный транспорт помогает клетке регулировать уровни натрия и калия, перемещая ионы против градиента концентрации.

Вторичный активный транспорт

Вторичный активный транспорт включает одновременный перенос двух разных веществ. Одно вещество транспортируется вниз по градиенту концентрации, обеспечивая энергию, необходимую для транспортировки второго вещества против градиента.Белки-антипорты перемещают два вещества в противоположных направлениях. Например, натрий-кальциевый антипорт пропускает три иона натрия в клетку для каждого экспортированного иона кальция. Белки Симпорта перемещают два вещества в одном направлении. Вторичный активный транспорт не использует АТФ.

Ссылки

Ресурсы

Биография писателя

Базируясь в Гринвилле, Южная Каролина, Эрик Банк пишет статьи, связанные с бизнесом, с 1985 года. Он имеет степень магистра делового администрирования Нью-Йоркского университета и степень магистра медицины.С. в области финансов Университета ДеПола. Вы можете увидеть образцы его работ на ericbank.com.

Клетка зеленого креста требует одобрения FDA для терапии CAR-T против рака поджелудочной железы

Корейская компания Green Cross Cell (GC Cell) объявила о планах получения одобрения USFDA для лечения CAR-T, нацеленного на мезотелин (MSLN-CAR-T). Недавно разработанное лечение призвано помочь пациентам с раком поджелудочной железы с модифицированными самообразованными Т-клетками, распознающими белок мезотелина, сверхэкспрессируемый опухолевыми клетками.

CAR-T терапия

Терапия химерного антигенного рецептора-Т-клеток (CAR-T) — это прорыв в лечении рака, который объединяет Т-клетки пациентов и специфические антигенсвязывающие лиганды для генерации Т-клеток, специфически атакующих опухолевые клетки. Первая терапия CAR-T была одобрена в 2017 году, нацеленная на CD19, для лечения острого лимфобластного лейкоза. Из-за большого количества пациентов, не прошедших курс лечения, лечение CAR-T начинает оказывать влияние на исследования рака во всем мире.Однако он наиболее эффективен против рака крови, а не солидных опухолей, которые не имеют специфических антигенных мишеней и обладают более подавляющей средой для иммунных клеток.

MSLN-CAR-T клетки

GC Pharma была основана в 1989 году и специализируется на исследованиях плазмы и клеток. Он расширяет свой бизнес в более конкретные области с такими филиалами, как GC Cell, которая специализируется на клеточной и иммунотерапии. После одобрения своего аутологичного продукта активированных Т-клеток, Immuncell-LC для гепатоцеллюлярной карциномы и глиобластомы в Корее, GC Cell применила свой опыт в иммунологии для обеспечения лечения солидного рака антимезотелином CAR-T.Мезотелин обычно немногочислен в полости или органеллах, но сверхэкспрессируется раком поджелудочной железы (80 ~ 85%), мезотелиомами (85 ~ 90%), раком яичников (60 ~ 65%), немелкоклеточным раком легких (60 ~ 65%), что делает его хорошей мишенью для борьбы с солидными опухолями.

Эксперименты на мышах с ортотопической карциномой поджелудочной железы со сверхэкспрессией MSLN показали, что после однократной внутрибрюшинной или внутривенной инъекции MSLN-CAR-T наблюдается 80-90% эффекта подавления опухоли, а после второй инъекции — 100% полного ответа.К настоящему времени доклинические результаты продемонстрировали специфичность CAR-T-клеток к опухолям, экспрессирующим MSLN, что позволяет преодолеть долгосрочное препятствие при лечении солидных опухолей с помощью CAR-T-терапии. Другой серьезной трудностью при лечении солидных опухолей является эффективность миграции и проникновения через соединительную ткань и окружающую ее микросреду к месту опухоли. Было также доказано, что это лечится с помощью MSLN-CAR-T с его 100% полной степенью ответа. И долгосрочная стойкость была подтверждена через 12 недель после экспериментов, что свидетельствует о потенциале лечения.

GC Cell планирует начать испытание фазы I в 2021 году после подтверждения эффективности лечения MSLN-CAR-T в испытании фазы III и создания дочерней компании в США, NOVACEL Inc. , для подготовки к будущему производству и продаже в США и Европе. рынки. Между тем, на брифинге компания раскрыла свой план по проведению клинических испытаний для утверждения Immuncell-LC в США. Компания CMO, имеющая квалификацию cGMP, использовала для производства клинических препаратов, и данные клинических испытаний фазы III, проведенных в Корее, и данные о безопасности более 5000 пациентов, которым вводили продукт за последние 10 лет, должны были быть поданы для удовлетворения требований. FDA.Генеральный директор GC Cell Ли Сан Чжу сказал: «Для лучшего развития группы расширение за рубежом больше не является выбором, а является неизбежным шагом, и мы приложим все усилия, чтобы улучшить себя, чтобы занять лидирующую позицию в отрасли. клеточной терапии ». Программа будет дополнительно расширена для лечения мезотелиомы и рака яичников, а также комбинированного исследования ингибиторов иммунных контрольных точек MSLN-CAR-T и PD-1. MSLN-CAR-T 3-го и 4-го поколения с повышенной эффективностью также изучается.

Статья по теме: Япония присвоила компании Lynparza статус орфанных лекарств от рака поджелудочной железы с мутацией BRCA зародышевой линии

Список литературы
  1. http: // www.globalgreencross.com/eng/company/family_view1.do

© www.geneonline.news. Все права защищены. Свяжитесь с : [email protected]

Связанные

3.1 Клеточная мембрана — анатомия и физиология

Цели обучения

К концу этого раздела вы сможете:

  • Опишите молекулярные компоненты, из которых состоит клеточная мембрана
  • Связать структуры клеточной мембраны с ее функциями
  • Опишите, как молекулы пересекают клеточную мембрану в зависимости от их свойств и градиентов концентрации
  • Сравните и сопоставьте различные типы пассивного транспорта с активным транспортом, приведя примеры каждого из них

Несмотря на различия в структуре и функциях, все живые клетки в многоклеточных организмах имеют окружающую клеточную мембрану. Подобно тому, как внешний слой вашей кожи отделяет ваше тело от окружающей среды, клеточная мембрана (также известная как плазматическая мембрана) отделяет внутреннее содержимое клетки от внешней среды. Эта клеточная мембрана обеспечивает защитный барьер вокруг клетки и регулирует, какие материалы могут проходить внутрь или наружу.

Структура и состав клеточной мембраны

Клеточная мембрана — чрезвычайно гибкая структура, состоящая в основном из двух слоев фосфолипидов («бислой»).Холестерин и различные белки также встроены в мембрану, обеспечивая мембране множество функций, описанных ниже.

Одна молекула фосфолипида имеет фосфатную группу на одном конце, называемую «головкой», и две расположенные рядом друг с другом цепи жирных кислот, которые составляют липидные «хвосты» (рис. 3.1.1). Липидные хвосты одного слоя обращены к липидным хвостам другого слоя, встречаясь на границе двух слоев. Головки фосфолипидов обращены наружу, один слой открыт для внутренней части клетки, а другой — снаружи (Рисунок 3. 1.1).

Рисунок 3.1.1 — Структура и бислой фосфолипидов: Молекула фосфолипида состоит из полярной фосфатной «головы», которая является гидрофильной, и неполярного липидного «хвоста», которая является гидрофобной. Ненасыщенные жирные кислоты приводят к изгибам гидрофобных хвостов. Фосфолипидный бислой состоит из двух соседних листов фосфолипидов, расположенных хвостом к хвосту. Гидрофобные хвосты соединяются друг с другом, образуя внутреннюю часть мембраны. Полярные головки контактируют с жидкостью внутри и снаружи ячейки.

Фосфатная группа заряжена отрицательно, что делает голову полярной и гидрофильной — или «водолюбивой». Гидрофильная молекула (или область молекулы) притягивается к воде. Таким образом, фосфатные головки притягиваются к молекулам воды как внеклеточной, так и внутриклеточной среды. С другой стороны, липидные хвосты не заряжены или неполярны и являются гидрофобными или «водобоязненными». Гидрофобная молекула (или область молекулы) отталкивается и отталкивается водой. Таким образом, фосфолипиды представляют собой амфипатические молекулы. Амфипатическая молекула — это молекула, которая содержит как гидрофильную, так и гидрофобную области. Фактически, мыло удаляет масляные и жирные пятна, потому что оно обладает амфипатическими свойствами. Гидрофильная часть может растворяться в промывочной воде, в то время как гидрофобная часть может задерживать жир в пятнах, которые затем можно смыть. Аналогичный процесс происходит в вашей пищеварительной системе, когда соли желчных кислот (состоящие из холестерина, фосфолипидов и соли) помогают расщеплять проглоченные липиды.

Поскольку фосфатные группы полярны и гидрофильны, они притягиваются к воде во внутриклеточной жидкости. Внутриклеточная жидкость (ICF) — это жидкость внутри клетки. Фосфатные группы также притягиваются к внеклеточной жидкости. Внеклеточная жидкость (ECF) — это жидкая среда за пределами клеточной мембраны (см. Рисунок выше). Поскольку липидные хвосты гидрофобны, они встречаются во внутренней области мембраны, исключая водянистую внутриклеточную и внеклеточную жидкость из этого пространства. Помимо фосфолипидов и холестерина, клеточная мембрана содержит множество белков, подробно описанных в следующем разделе.

Мембранные белки

Липидный бислой составляет основу клеточной мембраны, но он полностью усеян различными белками. Два различных типа белков, которые обычно связаны с клеточной мембраной, — это интегральный белок и периферический белок (рис. 3.1.2). Как следует из названия, интегральный белок — это белок, который встроен в мембрану.Существует множество различных типов интегральных белков, каждый из которых выполняет свои функции. Например, интегральный белок, который расширяет отверстие через мембрану для ионов, чтобы войти или выйти из клетки, известен как белок канала. Периферические белки обычно находятся на внутренней или внешней поверхности липидного бислоя, но также могут быть прикреплены к внутренней или внешней поверхности интегрального белка.

Рисунок 3.1.2. Клеточная мембрана: Клеточная мембрана клетки представляет собой бислой фосфолипидов, содержащий множество различных молекулярных компонентов, включая белки и холестерин, некоторые из которых имеют присоединенные углеводные группы.

Некоторые интегральные белки служат в качестве белков распознавания клеток, или поверхностных белков идентичности, которые маркируют идентичность клетки, чтобы ее могли распознать другие клетки. Некоторые интегральные белки действуют как ферменты или в клеточной адгезии между соседними клетками. Рецептор представляет собой тип белка распознавания, который может избирательно связывать определенную молекулу вне клетки, и это связывание вызывает химическую реакцию внутри клетки. Некоторые интегральные белки выполняют двойную роль как рецептор, так и ионный канал.Одним из примеров взаимодействия рецептор-канал являются рецепторы нервных клеток, которые связывают нейротрансмиттеры, такие как дофамин. Когда молекула дофамина связывается с белком дофаминового рецептора, канал в трансмембранном белке открывается, позволяя определенным ионам проникать в клетку. Периферические белки часто связаны с интегральными белками на внутренней клеточной мембране, где они играют роль в передаче клеточных сигналов или прикреплении к внутренним клеточным компонентам (например, цитоскелет, обсуждаемый позже).

Некоторые интегральные мембранные белки являются гликопротеинами.Гликопротеин — это белок, к которому прикреплены молекулы углеводов, которые распространяются во внеклеточную среду. Прикрепленные углеводные метки на гликопротеинах помогают распознавать клетки. Углеводы, которые происходят из мембранных белков и даже из некоторых мембранных липидов, вместе образуют гликокаликс. Гликокаликс представляет собой нечеткое покрытие вокруг клетки, образованное из гликопротеинов и других углеводов, прикрепленных к клеточной мембране. Гликокаликс может выполнять различные роли.Например, в нем могут быть молекулы, которые позволяют клетке связываться с другой клеткой, он может содержать рецепторы гормонов или может содержать ферменты, расщепляющие питательные вещества. Гликокализы, обнаруженные в организме человека, являются продуктами его генетической структуры. Они придают каждой из триллионов клеток личности «идентичность» принадлежности к его телу. Эта идентичность является основным способом, по которому клетки иммунной защиты человека «знают», что они не атакуют клетки собственного тела, но также является причиной того, что органы, пожертвованные другим человеком, могут быть отвергнуты.

Транспорт через клеточную мембрану

Одно из величайших чудес клеточной мембраны — это ее способность регулировать концентрацию веществ внутри клетки. Эти вещества включают ионы, такие как Ca ++ , Na + , K + и Cl , питательные вещества, включая сахара, жирные кислоты и аминокислоты, а также продукты жизнедеятельности, особенно диоксид углерода (CO 2 ), который должен покинуть камеру.

Двухслойная липидная структура мембраны обеспечивает первый уровень контроля.Фосфолипиды плотно упакованы вместе, и мембрана имеет гидрофобную внутреннюю часть. Эта структура обеспечивает избирательную проницаемость мембраны. Мембрана с селективной проницаемостью позволяет только веществам, отвечающим определенным критериям, проходить через нее без посторонней помощи. В случае клеточной мембраны только относительно небольшие неполярные материалы могут перемещаться через липидный бислой (помните, липидные хвосты мембраны неполярны). Некоторыми примерами этого являются другие липиды, кислород и углекислый газ, а также алкоголь.Однако водорастворимые материалы, такие как глюкоза, аминокислоты и электролиты, нуждаются в некоторой помощи для прохождения через мембрану, потому что они отталкиваются гидрофобными хвостами фосфолипидного бислоя. Все вещества, которые проходят через мембрану, делают это одним из двух общих методов, которые классифицируются в зависимости от того, требуется ли энергия или нет. Пассивный транспорт — это движение веществ через мембрану без затрат клеточной энергии. Напротив, активный транспорт — это движение веществ через мембрану с использованием энергии аденозинтрифосфата (АТФ).

Пассивный транспорт

Чтобы понять , как веществ пассивно перемещаются через клеточную мембрану, необходимо понимать градиенты концентрации и диффузию. Градиент концентрации — это разница в концентрации вещества в пространстве. Молекулы (или ионы) будут распространяться / диффундировать от места, где они более сконцентрированы, к месту с меньшей концентрацией, пока они не будут равномерно распределены в этом пространстве. (Когда молекулы движутся таким образом, они, как говорят, перемещаются на вниз на их градиента концентрации, от высокой концентрации к низкой.) Диффузия — это перемещение частиц из области с более высокой концентрацией в область с более низкой концентрацией. Несколько общих примеров помогут проиллюстрировать эту концепцию. Представьте, что вы находитесь в закрытой комнате. Если распылить флакон духов, молекулы запаха естественным образом распространятся из места, где они оставили флакон, во все углы комнаты, и это распространение будет продолжаться до тех пор, пока молекулы не будут равномерно распределены в комнате. Другой пример — ложка сахара в чашку чая.В конце концов сахар будет распространяться по всему чаю, пока не исчезнет градиент концентрации. В обоих случаях, если в комнате теплее или чай горячее, диффузия происходит еще быстрее, поскольку молекулы сталкиваются друг с другом и распространяются быстрее, чем при более низких температурах.

Внешний веб-сайт

Посетите эту ссылку, чтобы узнать о диффузии и о том, как она приводится в движение кинетической энергией молекул в растворе. Как температура влияет на скорость диффузии и почему?

Когда какое-либо вещество существует в большей концентрации на одной стороне полупроницаемой мембраны, такой как клеточные мембраны, любое вещество, которое может перемещаться вниз по градиенту своей концентрации через мембрану, будет делать это.Если вещества могут перемещаться через клеточную мембрану без затрат энергии клетки, движение молекул называется пассивным переносом. Рассмотрим вещества, которые могут легко диффундировать через липидный бислой клеточной мембраны, такие как кислород (O 2 ) и диоксид углерода (CO 2 ). Эти маленькие жирорастворимые газы и другие маленькие жирорастворимые молекулы могут растворяться в мембране и входить или выходить из клетки, следуя градиенту их концентрации. Этот механизм движения молекул через клеточную мембрану со стороны, где они более сконцентрированы, в сторону, где они менее сконцентрированы, представляет собой форму пассивного транспорта, называемого простой диффузией . O 2 обычно диффундирует в клетки, потому что он более сконцентрирован вне них, а CO 2 обычно диффундирует из клеток, потому что он более сконцентрирован внутри них.

Прежде чем двигаться дальше, важно понять, что градиенты концентрации кислорода и углекислого газа всегда будут существовать в живой клетке и никогда не достигнут равного распределения. Это связано с тем, что клетки быстро потребляют кислород во время метаболизма, и поэтому обычно внутри клетки концентрация O 2 ниже, чем снаружи.В результате кислород будет диффундировать извне клетки напрямую через липидный бислой мембраны в цитоплазму внутри клетки. С другой стороны, поскольку клетки продуцируют CO 2 как побочный продукт метаболизма, концентрации CO 2 повышаются в цитоплазме; следовательно, CO 2 будет перемещаться из клетки через липидный бислой во внеклеточную жидкость, где его концентрация ниже. (Рисунок 3.1.3).

Рисунок 3.1.3 — Простая диффузия через клеточную (плазменную) мембрану: Структура липидного бислоя позволяет небольшим незаряженным веществам, таким как кислород и углекислый газ, и гидрофобным молекулам, таким как липиды, проходить через клеточную мембрану вниз. их градиент концентрации путем простой диффузии.

Большие полярные или ионные молекулы, которые являются гидрофильными, не могут легко пересечь фосфолипидный бислой. Заряженные атомы или молекулы любого размера не могут пересечь клеточную мембрану посредством простой диффузии, поскольку заряды отталкиваются гидрофобными хвостами внутри бислоя фосфолипидов. Растворенные вещества, растворенные в воде по обе стороны от клеточной мембраны, будут иметь тенденцию диффундировать вниз по градиенту их концентрации, но поскольку большинство веществ не могут свободно проходить через липидный бислой клеточной мембраны, их движение ограничено белковыми каналами и специализированными транспортными механизмами в мембране. . Облегченная диффузия — это процесс диффузии, используемый для тех веществ, которые не могут пересекать липидный бислой из-за своего размера, заряда и / или полярности, но делают это вниз по градиенту их концентрации (рис. 3.1.4). Например, несмотря на то, что ионы натрия (Na + ) сильно сконцентрированы вне клеток, эти электролиты заряжены и не могут проходить через неполярный липидный бислой мембраны. Их диффузии способствуют мембранные белки, которые образуют натриевые каналы (или «поры»), так что ионы Na + могут перемещаться вниз по градиенту их концентрации из-за пределов клеток внутрь клеток.Типичным примером облегченной диффузии с использованием белка-носителя является перемещение глюкозы в клетку, где она используется для производства АТФ. Хотя глюкоза может быть более концентрированной вне клетки, она не может пересекать липидный бислой посредством простой диффузии, потому что она и большая, и полярная, и, следовательно, отталкивается фосфолипидной мембраной. Чтобы решить эту проблему, специальный белок-носитель, называемый переносчиком глюкозы, будет переносить молекулы глюкозы в клетку, чтобы облегчить ее внутреннюю диффузию.Разница между каналом и носителем заключается в том, что носитель обычно меняет форму в процессе диффузии, а канал — нет. Есть много других растворенных веществ, которые должны пройти через облегченную диффузию, чтобы попасть в клетку, например, аминокислоты, или выйти из клетки, например, отходы.

Рисунок 3.1.4 — Облегченная диффузия: (a) Облегченная диффузия веществ, пересекающих клеточную (плазматическую) мембрану, происходит с помощью белков, таких как канальные белки и белки-носители.Канальные белки менее избирательны, чем белки-носители, и обычно легко различают свой груз в зависимости от размера и заряда. (б) Белки-носители более селективны, часто позволяя пересекаться только одному конкретному типу молекул.

Осмос

Специализированный пример облегченного транспорта — вода, движущаяся через клеточную мембрану всех клеток через белковые каналы, известные как аквапорины. Осмос — это диффузия воды через полупроницаемую мембрану от места, где относительная вода больше, к месту, где относительная вода меньше (вниз по градиенту концентрации воды) (Рисунок 3.1.5).

Рисунок 3.1.5 — Осмос: Осмос — это диффузия воды через полупроницаемую мембрану вниз по градиенту ее концентрации. Если мембрана проницаема для воды, но не для растворенного вещества, вода уравняет свою концентрацию, диффундируя в сторону более низкой концентрации воды (и, следовательно, в сторону более высокой концентрации растворенного вещества). В стакане слева раствор с правой стороны мембраны гипертонический.

Сами по себе клетки не могут регулировать движение молекул воды через свою мембрану, поэтому важно, чтобы клетки подвергались воздействию среды, в которой концентрация растворенных веществ вне клеток (во внеклеточной жидкости) равна концентрации растворенные вещества внутри клеток (в цитоплазме).Два раствора, которые имеют одинаковую концентрацию растворенных веществ, называются изотоническими (равное натяжение). Когда клетки и их внеклеточная среда изотоничны, концентрация молекул воды одинакова снаружи и внутри клеток, и клетки сохраняют свою нормальную форму (и функцию).

Осмос возникает, когда существует дисбаланс растворенных веществ за пределами клетки по сравнению с внутри клетки. Раствор, который имеет более высокую концентрацию растворенных веществ, чем другой раствор, называется гипертоническим , а молекулы воды имеют тенденцию диффундировать в гипертонический раствор (рис.1.6). Клетки в гипертоническом растворе будут сморщиваться, когда вода покидает клетку посредством осмоса. Напротив, раствор, который имеет более низкую концентрацию растворенных веществ, чем другой раствор, называется гипотоническим , и молекулы воды имеют тенденцию диффундировать из гипотонического раствора. Клетки в гипотоническом растворе будут поглощать слишком много воды и набухать, что в конечном итоге может привести к взрыву. Важнейшим аспектом гомеостаза живых существ является создание внутренней среды, в которой все клетки тела находятся в изотоническом растворе. Различные системы органов, особенно почки, работают над поддержанием этого гомеостаза.

Рисунок 3.1.6 — Концентрация раствора: Гипертонический раствор имеет более высокую концентрацию растворенного вещества, чем другой раствор. Изотонический раствор имеет концентрацию растворенного вещества, равную другому раствору. Гипотонический раствор имеет меньшую концентрацию растворенного вещества, чем другой раствор.

Активный транспорт

Для всех способов транспортировки, описанных выше, ячейка не расходует энергию.Мембранные белки, которые помогают в пассивном переносе веществ, делают это без использования АТФ. Во время первичного активного транспорта требуется АТФ для перемещения вещества через мембрану с помощью мембранного белка и против его градиента концентрации.

Один из наиболее распространенных типов активного транспорта включает белки, которые служат насосами. Слово «насос», вероятно, вызывает в воображении мысли об использовании энергии для накачки шины велосипеда или баскетбольного мяча. Точно так же энергия АТФ требуется этим мембранным белкам для транспортировки веществ — молекул или ионов — через мембрану против градиентов их концентрации (из области низкой концентрации в область высокой концентрации).

Натрий-калиевый насос , который также называется Na + / K + АТФаза, транспортирует натрий из клетки, одновременно перемещая калий в клетку. Насос Na + / K + — это важный ионный насос, присутствующий в мембранах всех клеток. Активность этих насосов в нервных клетках настолько велика, что на нее приходится большая часть использования ими АТФ.

Рис. 3.1.7 Натриево-калиевый насос находится во многих клеточных (плазматических) мембранах.Насос, работающий от АТФ, перемещает ионы натрия и калия в противоположных направлениях, каждый против своего градиента концентрации. В одном цикле насоса три иона натрия вытесняются из ячейки, а два иона калия импортируются в ячейку.

Активные транспортные насосы могут также работать вместе с другими активными или пассивными транспортными системами для перемещения веществ через мембрану. Например, натрий-калиевый насос поддерживает высокую концентрацию ионов натрия вне клетки. Следовательно, если клетке нужны ионы натрия, все, что ей нужно сделать, это открыть пассивный натриевый канал, поскольку градиент концентрации ионов натрия заставит их диффундировать в клетку.Таким образом, действие активного транспортного насоса (натриево-калиевый насос) обеспечивает пассивный транспорт ионов натрия, создавая градиент концентрации. Когда активный транспорт обеспечивает перенос другого вещества таким образом, это называется вторичным активным транспортом.

Симпортеры — это вторичные активные переносчики, которые перемещают два вещества в одном направлении. Например, симпортер натрий-глюкоза использует ионы натрия, чтобы «втягивать» молекулы глюкозы в клетку. Поскольку клетки хранят глюкозу для получения энергии, глюкоза обычно находится в более высокой концентрации внутри клетки, чем снаружи; однако из-за действия натрий-калиевого насоса ионы натрия легко диффундируют в клетку при открытии симпортера. Поток ионов натрия через симпортер обеспечивает энергию, которая позволяет глюкозе перемещаться через симпортер в клетку против градиента ее концентрации.

И наоборот, антипортеры — это вторичные активные транспортные системы, которые транспортируют вещества в противоположных направлениях. Например, антипортер ионов натрия и водорода использует энергию поступающего внутрь потока ионов натрия для перемещения ионов водорода (H + ) из клетки. Натрий-водородный антипортер используется для поддержания pH внутри клетки.

Другие формы мембранного транспорта

Другие формы активного транспорта не связаны с мембранными переносчиками. Эндоцитоз (попадание «в клетку») — это процесс поглощения клеткой материала путем охвата его частью своей клеточной мембраны с последующим отщипыванием этой части мембраны (рис. 3.1.8). После защемления часть мембраны и ее содержимое становятся независимыми внутриклеточными пузырьками. Везикула представляет собой мембранный мешок — сферическую и полую органеллу, ограниченную двухслойной липидной мембраной. Эндоцитоз часто приносит в клетку материалы, которые необходимо расщепить или переварить. Фагоцитоз («поедание клеток») — это эндоцитоз крупных частиц. Многие иммунные клетки участвуют в фагоцитозе вторгающихся патогенов. Как и маленькие пак-человечки, их работа — патрулировать ткани тела на предмет нежелательных веществ, таких как вторжение в бактериальные клетки, фагоцитировать их и переваривать. В отличие от фагоцитоза, пиноцитоз («питье клеток») переносит жидкость, содержащую растворенные вещества, в клетку через мембранные везикулы.

Рисунок 3.1.8 — Три формы эндоцитоза: Эндоцитоз — это форма активного транспорта, при котором клетка окружает внеклеточные материалы, используя свою клеточную мембрану. (а) При фагоцитозе, который является относительно неселективным, клетка поглощает крупные частицы в более крупные пузырьки, известные как вакуоли. (б) При пиноцитозе клетка поглощает мелкие частицы жидкости. (c) Напротив, рецепторно-опосредованный эндоцитоз довольно селективен. Когда внешние рецепторы связывают конкретный лиганд, клетка отвечает эндоцитозом лиганда.

Фагоцитоз и пиноцитоз захватывают большие части внеклеточного материала, и они, как правило, не обладают высокой селективностью в отношении веществ, которые они вносят. Клетки регулируют эндоцитоз определенных веществ через рецептор-опосредованный эндоцитоз. Эндоцитоз, опосредованный рецепторами — это эндоцитоз, вызываемый участком клеточной мембраны, который содержит множество рецепторов, специфичных для определенного вещества. Как только поверхностные рецепторы свяжут достаточное количество специфического вещества (лиганда рецептора), клетка будет эндоцитозировать часть клеточной мембраны, содержащую комплексы рецептор-лиганд.Таким образом, эритроциты эндоцитируют железо, необходимый компонент гемоглобина. Железо связано с белком, который называется трансферрином в крови. Специфические рецепторы трансферрина на поверхности эритроцитов связывают молекулы железо-трансферрин, и клетка эндоцитирует комплексы рецептор-лиганд.

В отличие от эндоцитоза, экзоцитоз (извлечение «из клетки») — это процесс экспорта клетками материала с использованием везикулярного транспорта (рис. 3.1.9). Многие клетки производят вещества, которые необходимо секретировать, как фабрика, производящая продукт на экспорт.Эти вещества обычно упакованы в мембраносвязанные везикулы внутри клетки. Когда мембрана везикулы сливается с клеточной мембраной, везикула выделяет свое содержимое в интерстициальную жидкость. Затем мембрана везикул становится частью клеточной мембраны.

Конкретные примеры экзоцитоза включают клетки желудка и поджелудочной железы, производящие и секретирующие пищеварительные ферменты посредством экзоцитоза (рис. 3.1.10), а также эндокринные клетки, производящие и секретирующие гормоны, которые разносятся по всему телу.

Добавление новой мембраны к плазматической мембране обычно связано с эндоцитозом, поэтому клетка не увеличивается постоянно. Благодаря этим процессам клеточная мембрана постоянно обновляется и изменяется по мере необходимости.

Рисунок 3.1.9 — Экзоцитоз: Экзоцитоз очень похож на эндоцитоз в обратном направлении. Материал, предназначенный для экспорта, упаковывается в пузырьки внутри клетки. Мембрана везикулы сливается с клеточной мембраной, и содержимое высвобождается во внеклеточное пространство. Рисунок 3.1.10 — Ферментные продукты клеток поджелудочной железы: Ацинарные клетки поджелудочной железы производят и секретируют множество ферментов, которые переваривают пищу. Крошечные черные гранулы на этой электронной микрофотографии представляют собой секреторные везикулы, наполненные ферментами, которые будут выводиться из клеток посредством экзоцитоза. LM × 2900. (Микрофотография предоставлена ​​Медицинской школой Риджентс Мичиганского университета © 2012)

Заболевания клеток: муковисцидоз

Муковисцидоз (МВ) поражает примерно 30 000 человек в Соединенных Штатах, при этом ежегодно регистрируется около 1000 новых случаев. Это генетическое заболевание наиболее известно своим поражением легких, вызывающим затрудненное дыхание и хронические легочные инфекции, но оно также поражает печень, поджелудочную железу и кишечник. Всего около 50 лет назад прогноз для детей, рожденных с МВ, был очень мрачным — ожидаемая продолжительность жизни редко превышала 10 лет. Сегодня, с развитием медицины, многие пациенты с МВ доживают до 30 лет.

Симптомы CF возникают в результате неисправности мембранного ионного канала, называемого регулятором трансмембранной проводимости при кистозном фиброзе, или CFTR.У здоровых людей белок CFTR является интегральным мембранным белком, который переносит ионы Cl– из клетки. У человека с МВ ген CFTR мутирован, таким образом, клетка производит дефектный белок канала, который обычно не включается в мембрану, а вместо этого разрушается клеткой.

CFTR требует ATP для функционирования, что делает его Cl– транспортной формой активного транспорта. Это долгое время озадачивало исследователей, потому что ионы Cl– на самом деле стекают на вниз по градиенту их концентрации на при выходе из клеток. Активный транспорт обычно перекачивает ионы против их градиента концентрации, но CFTR представляет собой исключение из этого правила.

В нормальной легочной ткани движение Cl– из клетки поддерживает богатую Cl – отрицательно заряженную среду непосредственно вне клетки. Это особенно важно в эпителиальной выстилке дыхательной системы. Клетки респираторного эпителия выделяют слизь, которая улавливает пыль, бактерии и другой мусор. Реснички (множественное число = реснички) — это один из волосковидных придатков, обнаруженных на определенных клетках.Реснички на эпителиальных клетках перемещают слизь и ее захваченные частицы по дыхательным путям от легких к внешней стороне. Для эффективного продвижения вверх слизь не может быть слишком вязкой, скорее, она должна иметь жидкую водянистую консистенцию. Транспорт Cl– и поддержание электроотрицательной среды за пределами клетки привлекает положительные ионы, такие как Na +, во внеклеточное пространство. Накопление ионов Cl– и Na + во внеклеточном пространстве создает богатую растворенными веществами слизь с низкой концентрацией молекул воды. В результате через осмос вода перемещается из клеток и внеклеточного матрикса в слизь, «разжижая» ее. В нормальной респираторной системе слизь остается достаточно разбавленной, чтобы ее можно было вытеснить из дыхательной системы.

Если канал CFTR отсутствует, ионы Cl– не выводятся из клетки в достаточном количестве, что препятствует их захвату положительными ионами. Отсутствие ионов в секретируемой слизи приводит к отсутствию нормального градиента концентрации воды.Таким образом, отсутствует осмотическое давление, втягивающее воду в слизь. Образующаяся слизь густая и липкая, и мерцательный эпителий не может эффективно удалить ее из дыхательной системы. Проходы в легких блокируются слизью вместе с мусором, который она переносит. Бактериальные инфекции возникают легче, потому что бактериальные клетки не выводятся из легких эффективно.

Обзор главы

Клеточная мембрана обеспечивает барьер вокруг клетки, отделяя ее внутренние компоненты от внеклеточной среды. Он состоит из фосфолипидного бислоя с гидрофобными внутренними липидными «хвостами» и гидрофильными внешними фосфатными «головками». По всему бислою разбросаны различные мембранные белки, вставленные в него и прикрепленные к нему на периферии. Клеточная мембрана избирательно проницаема, позволяя лишь ограниченному количеству материалов диффундировать через ее липидный бислой. Все материалы, которые проходят через мембрану, делают это с использованием пассивных (не требующих энергии) или активных (требующих энергии) процессов переноса.Во время пассивного транспорта материалы перемещаются путем простой диффузии или облегченной диффузии через мембрану вниз по градиенту их концентрации. Вода проходит через мембрану в процессе диффузии, называемом осмосом. Во время активного переноса энергия расходуется на содействие движению материала через мембрану в направлении против градиента их концентрации. Активный транспорт может происходить с помощью протеиновых насосов или везикул.

Вопросы по интерактивной ссылке

Посетите эту ссылку, чтобы узнать о диффузии и о том, как она приводится в движение кинетической энергией молекул в растворе. Как температура влияет на скорость диффузии и почему?

Более высокие температуры ускоряют диффузию, потому что молекулы обладают большей кинетической энергией при более высоких температурах.

Обзорные вопросы

Вопросы критического мышления

Какие материалы могут легко диффундировать через липидный бислой и почему?

Только материалы относительно небольшого размера и неполярные могут легко диффундировать через липидный бислой.Крупные частицы не могут поместиться между отдельными фосфолипидами, которые упакованы вместе, а полярные молекулы отталкиваются гидрофобными / неполярными липидами, выстилающими внутреннюю часть бислоя.

Почему рецептор-опосредованный эндоцитоз считается более избирательным, чем фагоцитоз или пиноцитоз?

Эндоцитоз, опосредованный рецепторами

, более селективен, поскольку вещества, которые попадают в клетку, являются специфическими лигандами, которые могут связываться с рецепторами, подвергающимися эндоцитозу. С другой стороны, фагоцитоз или пиноцитоз не обладают такой рецепторно-лигандной специфичностью и приносят любые материалы, которые оказываются близко к мембране, когда она покрывается оболочкой.

Что общего между осмосом, диффузией, фильтрацией и движением ионов от одного заряда? Чем они отличаются?

Эти четыре явления похожи в том смысле, что они описывают движение веществ по определенному типу градиента. Осмос и диффузия включают движение воды и других веществ вниз по градиенту их концентрации, соответственно.Фильтрация описывает движение частиц вниз по градиенту давления, а движение ионов от одноименного заряда описывает их движение вниз по их электрическому градиенту.

TOAST: улучшение оценки клеточного состава без сравнения с помощью межклеточного дифференциального анализа | Геномная биология

Обзор метода

В этой работе мы разрабатываем итерационный алгоритм для улучшения выбора признаков. На рис. 1 интуитивно понятен общий рабочий процесс предлагаемого метода. Учитывая исходную матрицу данных Y и список начальных характеристик, этап (a) заключается в проведении RF-деконволюции для оценки пропорций смеси. Шаг (b) с расчетными пропорциями заключается в том, чтобы идентифицировать специфические для типа клеток особенности с использованием межклеточного дифференциального анализа. Эти функции затем используются для РЧ-деконволюции на этапе (а) в новой итерации. Повторяя шаги (а) и (b), обновленный список функций может лучше уловить различие типов ячеек и улучшить РЧ деконволюцию по сравнению с исходными функциями, которые обычно выбираются путем выбора наиболее изменчивых.Подробные обозначения и алгоритм описаны в разделе «Метод и материал».

Рис. 1

Схема, иллюстрирующая предлагаемый способ. Мы предполагаем четыре типа клеток ( K = 4) и шесть субъектов ( N = 6). Наш метод начинается с исходной матрицы данных Y и списка исходных маркеров. На этапе а пропорции смеси оцениваются с использованием существующих алгоритмов РЧ деконволюции. На этапе b выполняется дифференциальный анализ типов ячеек, чтобы идентифицировать специфические особенности типов ячеек как обновленный список характеристик.Мы улучшаем выбор функций и РЧ деконволюцию, повторяя шаги (а) и (б)

Предлагаемый метод TOAST, по сути, является методом выбора признаков и, таким образом, может использоваться с существующими безопорными алгоритмами для улучшения РЧ деконволюции. Чтобы оценить полезность и гибкость TOAST, мы проводим обширное моделирование и анализ реальных данных как данных экспрессии генов, так и данных метилирования ДНК. Мы применяем TOAST с наиболее популярными безреференсными методами: deconf [19] для данных экспрессии генов и RefFreeEWAS [22] и BayesCCE [23] для данных о метилировании ДНК.

Моделирование

Чтобы всесторонне оценить предложенный метод, мы разрабатываем серию исследований моделирования, в которых мы можем вручную контролировать процедуру смешивания клеток и размеры выборки. Данные моделирования генерируются на основе реальных экспериментов с микрочипами, один для экспрессии генов, а другой для метилирования ДНК. Мы оцениваем влияние нескольких факторов на результаты деконволюции, включая размер выборки, выбор начального маркера, выбор конечной точки и количество типов ячеек в смеси.Процедура моделирования подробно описана в разделе «Метод и материал». В каждой настройке моделирования представленные результаты суммируются по 100 наборам данных Монте-Карло.

Чтобы получить справедливую оценку предлагаемого метода, мы применяем ряд показателей, включая корреляции и среднеквадратичное смещение (RMSBias) расчетных и истинных пропорций, совпадения с истинными характеристиками конкретных типов клеток, степень соответствия и среднеквадратичное значение. квадратичная ошибка (RMSE) подобранной модели деконволюции.Эти метрики количественно определяют результаты деконволюции, исходя из качества предполагаемых пропорций, точности выбранных функций и качества общей модели деконволюции. Эти показатели использовались в нескольких предыдущих исследованиях [17, 23, 27, 46]. Подробности расчета этих показателей доступны в разделе «Метод и материал». Используя эти показатели, более высокие корреляции с истинными пропорциями, большее количество совпадений с маркерами, зависящими от типа ячеек, более высокая степень соответствия, меньшее RMSBias и RMSE указывают на лучшую производительность деконволюции.

Бенчмаркинг TOAST посредством моделирования

Сначала мы оцениваем предложенный метод в моделировании на основе экспрессии генов, где deconf используется в качестве метода деконволюции. На рисунке 2а показаны корреляции расчетных и истинных пропорций в начальной точке (количество итераций = 0) и после нескольких итераций применения предложенного метода для каждого из четырех типов ячеек (левые панели) и усредненные по четырем типам ячеек (правые панели ). От верхнего ряда к нижнему ряду размеры выборок увеличиваются с 50, 100 до 200.Из левых панелей видно, что в целом корреляции между расчетными и истинными пропорциями продолжают увеличиваться во время итерации для всех четырех типов ячеек. Улучшения более значительны и в то же время более стабильны при больших размерах выборки. На правых панелях мы сравниваем средние корреляции по четырем типам ячеек из предложенного метода (черные сплошные линии) и с использованием 1000 «реальных» характеристик, характерных для типа ячеек (красные пунктирные линии). Здесь реальные характеристики типов клеток получены из анализа профилей чистых типов клеток.Обратите внимание, что эти функции, зависящие от типа ячеек, недоступны в реальных наборах данных. Результаты на правой панели рис. 2a показывают, что наша итеративная процедура дает аналогичные или даже немного лучшие результаты, чем при использовании истинно специфичных для типа клеток функций. Это указывает на то, что наш метод может лучше идентифицировать специфические для типа клеток особенности, чем использование эталонных панелей, которые обычно имеют ограниченный размер выборки (например, только одна биологическая копия в текущем имитационном исследовании) и биологические вариации. В реальных сценариях, когда эталонные панели часто получают из популяции, отличной от исследуемых выборок, в эталоне могут быть ошибки.Когда смещения в существующих контрольных панелях велики, TOAST может обеспечить лучшую производительность, чем использование внешних контрольных панелей.

Рис. 2

Результаты моделирования на основе набора данных микрочипа экспрессии генов (GSE19830). a Корреляция между расчетными и истинными пропорциями по количеству итераций. Левая панель : диаграмма корреляций для четырех типов ячеек по количеству итераций. Правая панель и : средние корреляции между четырьмя типами ячеек по количеству итераций. b Количество перекрытий с истинными маркерами типа ячейки (CTS) до и после итераций в верхней левой панели, среднеквадратичное смещение (RMSBias) в верхней правой панели, степень соответствия в нижней левой панели , и среднеквадратичная ошибка (RMSE) в правом нижнем углу. Размер выборки 100 для b . Значения p в каждой панели получены с помощью парного теста t . Красный шрифт указывает на статистическую значимость. 1001–2000 самых изменчивых объектов выбираются в качестве начальных объектов.Базовая производительность представлена ​​в столбцах «количество итераций = 0» в столбцах и и «До» в столбцах b

На рис. 2b показано изменение других показателей до и после применения предложенного метода с использованием 100 смоделированных образцов. Мы наблюдаем, что применение предложенного метода значительно увеличивает количество перекрытий с особенностями типа ячейки ( p <1 e −16) и степенью соответствия ( p <1 e −16) и значительно снижает RMSBias ( p <1 e −16) и RMSE ( p <1 e −16).Дополнительный файл 1: Рисунок S8 — это диаграмма Венна, которая интуитивно представляет пересечения между исходными, выбранными TOAST и специфичными для типа ячейки функциями.

Дополнительный файл 1: На рисунке S1 представлены результаты моделирования исследования, основанного на данных метилирования ДНК с помощью RefFreeEWAS , одного из самых популярных инструментов деконволюции без ссылки, разработанного для данных метилирования ДНК. Мы наблюдаем аналогичную тенденцию в улучшении корреляций с истинными пропорциями и в других показателях.По сравнению с рис. 2, одним из основных отличий является то, что приложение к данным метилирования ДНК требует большего количества итераций для схождения, особенно для меньших размеров выборки. Мы подозреваем, что это связано с большим количеством признаков в данных о метилировании ДНК (54 674 объекта в наборе данных смоделированной экспрессии генов по сравнению с 459 226 признаков в наборе данных смоделированного метилирования ДНК), что приводит к повышенной сложности в идентификации хорошего набора межклеточных тип дифференциальных характеристик. Тем не менее, это моделирование демонстрирует, что предлагаемый метод эффективно улучшает оценку доли.

Выбор исходных характеристик

Как описано в разделе «Предпосылки», вариативность обычно используется для выбора «информативных» функций для деконволюции без ссылок. В том же направлении мы рассматриваем шесть различных подходов к выбору начальных характеристик, включая 1000 самых изменчивых функций; от 1001 до 2000, от 2001 до 3000, от 5001 до 6000 и от 10 001 до 11 000 наиболее изменчивых функций; и 1000 случайно выбранных функций. Рисунок 3 и Дополнительный файл 1: Рисунок S7 демонстрируют, что независимо от используемого метода улучшения от без применения TOAST («Начальные» столбцы) до после применения TOAST («TOAST» столбцы) являются согласованными и стабильными для разных размеров выборки (строки ) и типов данных (экспрессия гена на рис.3 и метилирование ДНК в дополнительном файле 1: рисунок S7). Даже случайно выбранный набор начальных функций может привести к существенным улучшениям после применения TOAST (дополнительный файл 1: рисунок S4). Это означает, что TOAST очень надежен и устойчив к выбору начальных функций.

Рис. 3

TOAST является стабильным с различным начальным выбором признаков в исследованиях моделирования экспрессии генов. Панели сверху вниз соответствуют размерам выборки 50, 100 и 200. Панели слева направо соответствуют различным методам выбора начальных признаков: верхние 1–1000 переменных предназначены для выбора 1000 самых переменных признаков, 1001–2000 состоит в том, чтобы выбрать 1001–2000 наиболее изменчивых признаков, аналогично 2001–3000, 5001–6000, 10001–11000 — это выбрать верхние 2001–3000, 5001–6000, 10001–11000 наиболее изменчивые признаки. Random 1000 — это случайный выбор 1000 функций в качестве начальных. На каждой панели «Начальный» и «TOAST» соответствуют результатам деконволюции без ссылки и без функции TOAST. Представленные результаты обобщают более 100 экспериментов Монте-Карло

Более подробное сравнение исходных выбранных характеристик показывает, что разные исходные характеристики лишь незначительно влияют на скорость схождения. Мы сравниваем использование 1000 наиболее изменчивых функций в качестве исходных (дополнительный файл 1: рис. S2, S3) с использованием второй 1000 наиболее изменяемых функций (рис.2, Дополнительный файл 1: Рисунок S1). Мы обнаружили, что последний набор функций требует меньше итераций для достижения удовлетворительных результатов деконволюции, чем первый набор. Однако при достаточном количестве итераций (например, 30 итераций) конечные корреляции с истинными пропорциями аналогичны для этих двух наборов начальных характеристик.

Для дальнейшего изучения этого явления мы сначала проверяем совпадения между выбранными характеристиками и истинными характеристиками, специфичными для типа клеток (идентифицированными из чистых профилей) в нашем исследовании моделирования с участием 100 моделируемых субъектов. Дополнительный файл 1. На рисунке S6a показана тенденция к увеличению перекрытий во время итерации. Эта тенденция очевидна как для первой 1000, так и для второй 1000 наиболее изменчивых функций в качестве начальных функций, однако вторая 1000 функций имеет большее количество перекрытий с функциями, зависящими от типа ячейки. Это объясняет, почему выбор второй 1000 функций может сойтись быстрее, чем первая 1000. С увеличением количества итераций разница между двумя строками в Дополнительном файле 1: Рисунок S6a уменьшается, что согласуется с аналогичными конечными корреляциями при использовании двух наборы исходных характеристик.

В том же направлении мы также сравниваем стандартные отклонения внутриклеточного типа для различных наборов функций: первые 1000 наиболее вариабельных функций, вторые 1000 наиболее вариабельных функций и функции, выбранные после применения TOAST, с использованием профилей чистой ткани. набора данных Mouse-Mix (описанного ниже). Как показано в Дополнительном файле 1: Рисунок S6b, 1000 наиболее изменчивых функций имеют большую дисперсию внутри ячейки, чем вторая 1000 наиболее изменчивых функций, а функции, выбранные после применения TOAST, имеют наименьшее изменение. Это указывает на то, что выбор наиболее изменчивых функций может быть не очень хорошей идеей в целом, поскольку большая дисперсия может происходить из-за типа внутри ячейки (в то время как желательны функции с большой вариацией между типами ячеек).

Учитывая, что конечная производительность при использовании различных начальных функций схожа, а наиболее изменяемые функции 1001–2000 имеют лучшую скорость сходимости, чем 1000 наиболее изменяемых функций, мы придерживаемся использования в качестве исходных функций 1001–2000 наиболее изменяемых функций.

Выбор конечной точки итераций

В дополнение к начальному выбору признаков также важно понимать, как выбрать конечную точку итераций.В идеале мы хотим выбрать итерацию, при которой соотношение расчетных и истинных пропорций достигает максимума. Однако эти корреляции невозможно вычислить, не зная истинных пропорций. Среднеквадратичная ошибка (RMSE) подобранных данных из методов деконволюции использовалась для выбора параметров настройки в алгоритме деконволюции [17]. Технически говоря, RMSE не имеет прямого отношения к корреляции с истинными пропорциями. Однако RMSE отражает соответствие модели деконволюции наблюдаемым данным, и лучшая пригодность обычно приводит к лучшей оценке пропорции.На рис. 4a и c показаны диаграммы рассеяния RMSE по сравнению с корреляциями с истинными пропорциями, полученные при исследовании экспрессии генов и моделирования метилирования ДНК, соответственно. Значительные отрицательные корреляции могут наблюдаться между RMSE и корреляциями с истинными пропорциями, что указывает на то, что меньшее RMSE связано с лучшей оценкой пропорции.

Рис. 4

Исследование выбора конечной точки. a , b Результаты настроек моделирования экспрессии генов. c , d Параметры моделирования метилирования ДНК. a , c Отрицательные корреляции между RMSE и корреляциями предполагаемых и истинных пропорций. b , d Ящичковые диаграммы корреляций с истинной пропорцией с использованием различных методов выбора конечных точек. Init основан на начальных возможностях. Iter20 основан на функциях после 20 итераций. Iter30 основан на функциях после 30 итераций. RMSE основан на результатах с наименьшим RMSE за 30 итераций. Наилучшая — это наилучшая возможная корреляция для всех итераций (недоступно при анализе реальных данных)

Рисунки 4b и d представляют собой прямоугольные диаграммы корреляций с истинными пропорциями с использованием различных конечных точек в алгоритме из моделирования экспрессии генов и метилирования ДНК. Init — это результат использования обычных радиочастотных методов без применения предложенного метода. Iter20 , Iter30 и RMSE — это разные способы выбора конечной точки. Best — лучший результат корреляции из 30 итераций. Обратите внимание, что Best не наблюдается при анализе реальных данных, но представлен здесь, чтобы мы знали о наилучших возможных результатах.

Мы обнаружили, что независимо от того, какой метод выбора конечной точки используется, увеличение корреляций с истинными пропорциями по сравнению с начальной точкой является значительным, что демонстрирует стабильность предлагаемого метода. Среди трех методов отбора конечных точек выбор по наименьшему среднему значению RMSE дает самые высокие средние корреляции в исследованиях как экспрессии генов, так и моделирования метилирования ДНК. Этот вывод также выполняется, если мы используем случайно выбранные начальные характеристики (дополнительный файл 1: рисунок S5). Наряду со значительными отрицательными корреляциями, наблюдаемыми на рис. 4a и c, мы решили выбрать конечную точку предложенного алгоритма по наименьшей RMSE. В нашем программном обеспечении пользователи могут указать общее количество итераций, и среди них будет выбираться итерация с наименьшим RMSE.Исходя из нашего опыта, 30 итераций достаточно для наборов данных по экспрессии генов и метилирования ДНК с четырьмя типами клеток и умеренным или большим размером выборки. Количество итераций должно быть увеличено для исследований с меньшим размером выборки (например, менее 50) или более типами клеток (например, 6 или более).

Влияние количества типов ячеек в смеси

Для радиочастотной деконволюции выбор подходящего количества типов ячеек является трудным вопросом. Мы предлагаем более подробное обсуждение выбора номеров типов ячеек в разделе «Обсуждения».Здесь мы используем наше исследование по моделированию метилирования ДНК, чтобы изучить влияние 6 типов клеток (CD4T, CD8T, Gran, Mono, NK, B-клетки) по сравнению с 4 типами клеток (CD4T + CD8T + NK, Gran, Mono, B-клетки) на ВЧ деконволюция и предлагаемый метод. Как и ожидалось, увеличение количества типов ячеек приводит к более низкой корреляции предполагаемых пропорций по сравнению с истинными пропорциями даже после применения TOAST (дополнительный файл 1: рисунок S9).

Мы считаем, что увеличение размера выборки имеет решающее значение для лучшей оценки пропорции, особенно с большим количеством типов клеток.Например, когда в смеси 6 типов клеток, корреляция между истинными и предполагаемыми пропорциями из TOAST может быть вдвое выше для 200 образцов по сравнению с 50 образцами. Более того, мы обнаружили, что TOAST обеспечивает большее улучшение производительности для 4 типов ячеек, чем для 6 типов ячеек, когда размер выборки средний (50 или 100). Это указывает на то, что при небольшом размере выборки лучше указать относительно небольшое количество типов ячеек и применить TOAST. Если эксперимент требует изучения большего количества типов клеток, увеличение размера выборки является наиболее эффективным подходом для повышения точности деконволюции.В реальных данных гетерогенные образцы могут содержать много разных типов клеток. Однако в смеси обычно преобладают всего несколько типов клеток, поэтому разумно просто смоделировать основные из них. На каком уровне следует комбинировать и моделировать типы клеток — еще один вопрос, заслуживающий дальнейшего изучения.

Совместимость с другим радиочастотным методом

TOAST — это метод выбора характеристик, который работает вместе с существующими радиочастотными методами деконволюции для оценки состава ячеек.Для всех приведенных выше результатов TOAST использует deconf, для экспрессии генов и RefFreeEWAS для деконволюции метилирования ДНК. Однако TOAST будет работать с другими методами радиочастотной деконволюции и улучшать результаты за счет лучшего выбора функций. Здесь мы выбираем современный метод деконволюции данных о метилировании ДНК, BayesCCE [23], чтобы продемонстрировать гибкость предлагаемого метода. В своей основополагающей статье, опубликованной в 2018 году, было показано, что BayesCCE превосходит существующие методы деконволюции, включая ReFACTor [47], NNMF [20] и MeDeCom [48].Здесь мы сравниваем производительность BayesCCE с применением TOAST для выбора функций и без нее.

Мы обнаружили, что TOAST может значительно улучшить производительность деконволюции BayesCCE (рис. 5). По сравнению с BayesCCE, пропорции, оцененные с помощью BayesCCE + T (BayesCCE со встроенным TOAST), достигают значительно более высокой корреляции с истинными пропорциями ( p = 7,9 e −07), меньшей среднеквадратичной ошибки ( p = 3,4 e −07) и среднеквадратичное смещение ( p = 5.8 e −4). Шаблон улучшения сохраняется в настройках с разными размерами выборки (дополнительный файл 1: рисунок S10), и улучшение становится более значительным с увеличением размера выборки.

Рис. 5

Предлагаемый метод может улучшить производительность деконволюции BayesCCE в исследованиях моделирования. BayesCCE — это результаты BayesCCE без применения TOAST. BayesCCE + T — это алгоритм BayesCCE с предложенным методом TOAST. Результаты основаны на 100 наборах данных моделирования метилирования ДНК с четырьмя типами клеток.Панели слева направо демонстрируют корреляцию оценочных и истинных пропорций (Corr с истинным свойством), среднеквадратичной ошибки и среднеквадратичного отклонения. В каждом наборе данных моделируется 200 образцов. Значения p получены из парного испытания t . Красные шрифты указывают на важные результаты испытаний. Коробчатые диаграммы суммированы из 100 экспериментов Монте-Карло

.

Результаты реальных данных

Хотя моделирование полезно для оценки того, насколько хорошо TOAST ведет себя в идеализированной синтетической обстановке, моделирование не может сообщить нам, насколько хорошо деконволюция выполняется в действительности. Чтобы полностью оценить TOAST в реальных приложениях, мы получаем шесть наборов данных, включая два набора данных по экспрессии генов, данные Mouse-Mix [8] и данные об иммунитете [14]), и четыре набора данных по метилированию ДНК, EPIC (European Prospective Investigation in Cancer and Nutrition). ) данные [49], данные старения [50], данные РА (ревматоидный артрит) [51] и данные груди [10].

Эти наборы данных разнообразны по ряду аспектов. Например, размеры выборки этих наборов данных варьируются от 12 (данные об иммунитете) до 689 (данные RA).И данные Mouse-Mix, и данные Immune имеют истинные пропорции из экспериментов, но остальные наборы данных не имеют «истинных» пропорций, чтобы обеспечить ориентиры. В качестве суррогата мы получаем эталонные панели крови из [4] с профилями шести типов клеток (CD8T, CD4T, NK, Bcell, Mono, Gran) и применяем метод деконволюции RB EpiDISH [24] для получения оценок пропорций. Более того, данные о груди собираются на основе здоровой ткани груди и не имеют справочной панели, на которую можно было бы ссылаться. Это прекрасный пример для демонстрации полезности RF-деконволюции.Чтобы оценить наш метод в случае отсутствия предварительной информации о количестве клеточного типа в ткани, мы принимаем степень согласия в дополнение к корреляции с истинными пропорциями или пропорциями RB в качестве показателей, поскольку для расчета степени соответствия не требуется известных истинных пропорций (подробности показаны раздел «Метод и материал»). Степень согласия широко использовалась в предыдущих исследованиях для оценки эффективности деконволюции [27]. Несмотря на то, что на него могут в некоторой степени влиять выбранные особенности, наши исследования с использованием моделирования показывают, что степень соответствия сильно и положительно коррелирует с «корреляциями с истинными пропорциями» (дополнительный файл 1: рисунок S11).Таким образом, это разумная метрика для оценки результатов деконволюции, поскольку лучшее соответствие с большей вероятностью будет связано с оценками, имеющими более высокую корреляцию с истинными пропорциями.

Сравнительный анализ TOAST с помощью шести экспериментов с реальными данными

На рисунке 6 показаны корреляции и степень согласия всех приложений с реальными данными. Эти анализы выявляют в большинстве случаев значительное увеличение корреляций с истинными пропорциями или пропорциями RB ( p = 0,0246) и во всех случаях существенное увеличение степени согласия ( p = 0.0139). Далее мы исследуем доли, оцененные до и после применения TOAST для каждого набора данных. Рис. 7 и Дополнительный файл 1. На рис. S12 – S14 показаны расчетные и истинные пропорции в начальной точке («До») и после применения TOAST («После»). Улучшения в оценке пропорций могут быть значительными для некоторых наборов данных. Например, в приложении к данным Mouse-Mix, показанном на рис. 7a, корреляции расчетных и истинных пропорций для печени увеличиваются с 0,857 до 0,923 после применения предложенного алгоритма.Точно так же корреляция увеличивается с 0,756 до 0,942 для мозга и с 0,862 до 0,964 для легких.

Рис. 6

Предлагаемый метод улучшает результаты деконволюции в приложениях с реальными данными. Коробчатые диаграммы показывают показатели оценки до и после обновления функций. a Корреляция расчетных и истинных (Mouse-Mix, наборы данных Immune) или основанных на справочных данных пропорций, вычисленных при деконволюции (EPIC, Aging, наборы данных RA). b Степень соответствия для моделей деконволюции до и после применения TOAST.Столбцы «До» на обоих графиках представляют собой исходные безреференсные результаты без применения TOAST. Небольшие шумы джиттера добавляются к точкам для лучшей визуализации.

Рис. 7

Оценка пропорции из набора данных Mouse-Mix (GSE19830, верхняя панель) и набора данных EPIC (GSE51032, нижняя панель). Левые панели a и b : расчетные пропорции по сравнению с истинными пропорциями без применения TOAST (базовая производительность). Правые панели a и b : оценочные и истинные пропорции после обновления выбора признаков с помощью предложенного алгоритма. «Истинная» пропорция набора данных EPIC получена с использованием метода деконволюции RB EpiDISH

Улучшения также можно наблюдать в приложениях для обработки данных о метилировании ДНК. Например, в эксперименте с данными EPIC корреляции увеличиваются с 0,0923 до 0,506 для В-клеток и с 0,367 до 0,551 для CD8T. Следует отметить, что, поскольку у нас нет истинных пропорций в наборах данных метилирования ДНК, результаты деконволюции RB могут сами по себе отклоняться от истины. Это могло бы объяснить корреляцию этих приложений ниже, чем на рис.7a и Дополнительный файл 1: Рисунок S12, которые имеют истинные пропорции для сравнения результатов. Тем не менее, предлагаемый нами метод по-прежнему демонстрирует значительные улучшения в оценке состава.

Данные груди не имеют ни истинных пропорций, ни пропорций RB из-за отсутствия профилей чистой ткани; таким образом, мы не можем представить корреляции или диаграмму разброса пропорций, как с другими наборами данных. Мы используем пакет RefFreeEWAS для определения количества типов ячеек, и в ходе анализа было выбрано шесть (в соответствии с [10]). Качество подгонки резко возрастает до и после применения TOAST (фиолетовые перечеркнутые квадраты на рис. 6b).

Мы дополнительно демонстрируем совместимость TOAST с BayesCCE и оцениваем производительность в трех наборах данных метилирования ДНК (EPIC, Aging и RA), которые собирают образцы крови, поскольку образцы крови имеют предварительные сведения о пропорциях крови, указанные в документе BayesCCE. Дополнительный файл 1. На рисунке S16 показано, что TOAST улучшает производительность как RefFreeEWAS, так и BayesCCE.С TOAST оба метода имеют более высокую среднюю абсолютную корреляцию и более низкую среднеквадратичную систематическую ошибку.

Сравнение оценок RB и RF в данных RA

Наконец, мы спрашиваем, имеют ли предполагаемые пропорции биологическое значение? Более того, нам интересно, между РБ и РФ, что дает более значимую оценку? Предыдущие исследования показали, что, когда доступна надежная контрольная панель, деконволюция RB может получить оценки пропорций с высокой точностью [14-17]. Однако, когда контрольную панель получают из субъектов с разными фенотипами, такими как возраст, пол и статус заболевания, из интересующей популяции, RF может дать более точные оценки доли, чем метод RB [30].

Набор данных

RA [51] олицетворяет такой сценарий, поскольку он собирает цельную кровь от 354 пациентов с РА и 335 нормальных контролей с мужчинами и женщинами в каждой группе, в то время как контрольная панель крови получена от 6 здоровых мужчин в отдельном исследовании [ 26]. Сообщалось, что РА может значительно изменить пропорции некоторых типов клеток крови у пациентов [52, 53], в результате чего пропорции клеток крови у пациентов с РА отличаются от здоровых людей. Таким образом, пропорции кровяных телец потенциально могут быть использованы для прогнозирования РА.Чтобы сравнить оценки пропорций с помощью различных методов, мы применяем десятикратную перекрестную проверку и используем оцененные пропорции для прогнозирования статуса болезни каждого пациента. Пропорции, которые могут лучше предсказать болезнь, считаются лучше оцененными.

Мы сравниваем метод RB EpiDISH, RF методы RefFreeEWAS, BayesCCE и методы RF с TOAST (RefFreeEWAS + T и BayesCCE + T) и суммируем результаты на рис. 8. На левой панели показаны пропорции, оцененные на основе RB и BayesCCE + T, а на правой панели показаны кривые точности-отзыва для прогнозирования RA на основе оцененных пропорций.На рисунке 8b показано, что все методы RF позволяют лучше прогнозировать заболевание, чем метод RB. Что наиболее важно, TOAST может значительно улучшить характеристики прогнозирования RefFreeEWAS или BayesEWAS по сравнению с исходными методами, что приводит к более биологически значимой оценке пропорции.

Рис. 8

Результаты анализа набора данных RA (GSE42861). a Коробчатые диаграммы расчетных долей пациентов с РА и контрольной группы, полученные на основе референтного метода деконволюции и BayesCCE с TOAST (BayesCCE + T). b Кривая точности-отзыва для прогнозирования статуса болезни с использованием оценочных пропорций, полученных с помощью различных методов. RefFreeEWAS и BayesCCE являются базовой производительностью без применения TOAST. Для построения кривых

используются усредненные результаты десятикратной перекрестной проверки.

Мы также исследуем влияние пола на эффективность прогнозов (дополнительный файл 1: рисунок S15). Как в мужской, так и в женской группах мы наблюдаем сопоставимые или улучшения после применения TOAST (желтые и красные линии) вместо TOAST (зеленые и фиолетовые линии).Эти результаты еще раз демонстрируют благоприятные и надежные характеристики предлагаемого метода. С другой стороны, мы наблюдаем большие улучшения при использовании TOAST у женщин, чем у мужчин. В мужских популяциях существует минимальное преимущество методов деконволюции без эталонных значений (цветные линии) по сравнению с эталонным методом (черная линия), в то время как преимущество более выражено в женской группе и в общей популяции. Мы полагаем, что это можно объяснить гендерными различиями в этиологии РА [54–56] и различиями в размере выборки (197 мужчин и 492 женщины). Тем не менее, TOAST по-прежнему обеспечивает надежную работу в улучшении оценки пропорций и прогнозов заболеваний как для мужских, так и для женских выборок.

Вовлечение кросс-презентирующей микроглии Т-лимфоцитами защищает мозг от инфекции носа. в том числе гриппом, редко поражают мозг. У мышей интраназальная инфекция вирусом везикулярного стоматита (VSV) действительно приводит к инфицированию сенсорных нейронов в обонятельной луковице.Используя VSV, который экспрессирует флуоресцентный репортер, Moseman

et al . исследовали способность VSV инфицировать отдельные типы клеток обонятельной луковицы. Хотя инфекция VSV ограничивалась нейронами внутри обонятельной луковицы, они обнаружили, что клетки микроглии, которые не были инфицированы VSV, являются ключевыми в праймировании Т-клеточных ответов, которые способствуют выведению вируса.

Abstract

Нейроэпителий — это поверхность носового барьера, населенная обонятельными сенсорными нейронами, которые обнаруживают запахи в дыхательных путях и передают эту информацию непосредственно в мозг через волокна аксонов. Эта поверхность барьера особенно уязвима для инфекций, однако респираторные инфекции редко вызывают смертельный энцефалит, что свидетельствует о высокоразвитой иммунологической защите. Здесь, используя модель на мышах, мы стремились понять механизм, с помощью которого клетки врожденного и адаптивного иммунитета препятствуют нейроинвазии вирусом везикулярного стоматита (VSV), потенциально летальным вирусом, который использует обонятельные сенсорные нейроны для проникновения в мозг после носовой инфекции. Исследования по картированию судьбы показали, что инфицированные нейроны центральной нервной системы (ЦНС) очищались нецитолитически, однако специфическая делеция главного комплекса гистосовместимости класса I (MHC I) из этих нейронов неожиданно не оказала влияния на вирусный контроль.Исследования прижизненной визуализации передачи сигналов кальция в вирус-специфических CD8 + Т-клетках показали, что резидентная микроглия головного мозга является релевантным источником комплексов вирусный пептид-MHC I. Микроглия не была инфицирована вирусом, но было обнаружено, что антиген перекрестно присутствует после получения от соседних нейронов. Истощение микроглии мешало передаче сигналов Т-клетками кальция и противовирусному контролю в головном мозге после носовой инфекции. В совокупности эти данные демонстрируют, что микроглия обеспечивает передовую защиту от нейроинвазивной носовой инфекции путем перекрестного представления антигена противовирусным Т-клеткам, которые нецитолитически очищают нейроны.Нарушения этой врожденной защиты, вероятно, делают мозг восприимчивым к нейротропным вирусам, таким как VSV, которые пытаются проникнуть в ЦНС через нос.

  • Copyright © 2020 Авторы, некоторые права защищены; обладатель исключительной лицензии Американской ассоциации содействия развитию науки. Отсутствие претензий к оригиналу US Government Works

Перекрестное заражение клеточной линии

«Имеющиеся данные свидетельствуют о том, что до одной трети линий опухолевых клеток, используемых в научных исследованиях, подвержены межвидовому или внутривидовому перекрестному заражению или были неправильно идентифицированы, что делает многие выводы сомнительными, если не полностью недействительными. »-Ланцет онкологии, т. 2, июль 2001 г., стр. 393

Здравствуйте, меня зовут HeLa, и я хорошо умею расти. Я буду расти в RPMI. Я буду расти в DMEM. Я буду расти с сывороткой. Я вырасту без. Мне просто очень нравится расти. Я не хочу доставлять неприятности, я действительно не хочу, но я расту везде, где могу. Кроме того, это то, что делает меня таким классным! Подумайте обо всех удивительных вещах, которые узнали ученые, потому что я был таким любезным. Итак, я не виноват, если меня случайно уронили в чашку для культивирования другой клетки и я занял ее место, я ничего не могу поделать, если другие клетки не успевают.Думаю, я говорю о том, что вы должны время от времени проверять свои другие клетки, инкубатор может быть настоящим местом, где поедают собаку, и им может потребоваться небольшой дополнительный контроль. Ознакомьтесь с ресурсами ниже для получения дополнительной информации.

Неправильная идентификация линий клеток человека: наука против политики — 2012
Доктор Ивонн Рид, специалист по аутентификации клеток в ATCC, выступила с этой презентацией на Европейской встрече по стволовым клеткам, проходившей в Сан-Диего, Калифорния, в феврале этого года. Ее доклад описывает историю проблемы и описывает, как научная политика может помочь искоренить заражение клеток и неправильную идентификацию.

Разработка консенсусного стандарта для аутентификации линий клеток человека: стандартизация STR-профилирования — часть I: история
Доктор Джон Мастерс из Университетского колледжа Лондона дает исторический обзор проблемы, выделяет некоторые примеры клеток линии, о которых известно, что они загрязнены или неправильно идентифицированы, и иллюстрирует, как эти «ложные» линии проникли в научную литературу.

Проверьте свои культуры! Список перекрестно загрязненных или ошибочно идентифицированных клеточных линий (Capes-Davis et al, 2010)
Авторы этого исследования изучили общедоступную информацию в PubMed, Wikipedia, веб-сайте ATCC и веб-сайтах других репозиториев клеток. составить исчерпывающий список клеточных линий, о которых известно, что они загрязнены или неправильно идентифицированы.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *